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1、目的:觀察高糖導(dǎo)致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷過(guò)程中,p38MAPK是否被激活,p38MAPK激活是否為蛋白激酶C(PKC)依賴(lài)途徑,并初步探討p38MAPK抑制劑SB203580對(duì)高糖誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞凋亡中的作用.從而探討p38MAPK在高糖損傷內(nèi)皮細(xì)胞中的作用.方法體外分離培養(yǎng)HUVECs,加入不同濃度葡萄糖(Glu)及用22mmoI/L Glu作用不同的時(shí)間,及蛋白激酶C(PKC)激動(dòng)劑佛波醇酯(PMA)、PKC特異抑
2、制劑GF109203X,p38MAPK特異抑制劑SB203580,采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Western-blot檢測(cè)磷酸化p38MAPK蛋白的表達(dá)部位及表達(dá)量,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)p38MAPKmRNA的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率.結(jié)論(1)22mmol/L及以上的高糖能引起人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增加磷酸化p38MAPK蛋白水平并增加p38MAPKmRNA水平,其作用呈時(shí)間、濃度依賴(lài)性.(2)高糖可能部分通過(guò)激活DAG
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