輕型TBI患者外周血SDF-1α-CXCR4表達(dá)及預(yù)后相關(guān)性分析.pdf

1、目的:現(xiàn)今針對(duì)輕型創(chuàng)傷性顱腦損傷（traumatic brain injury，TBI）的研究越來(lái)越受到神經(jīng)外科領(lǐng)域研究人員的關(guān)注，對(duì)此類患者目前尚缺少公認(rèn)的生物標(biāo)記及能對(duì)預(yù)后恢復(fù)水平進(jìn)行早期判斷的臨床指標(biāo)。經(jīng)前期研究證實(shí)，循環(huán)血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells，EPCs)可與重型TBI患者的預(yù)后相關(guān)。且本課題組前期研究證實(shí)，EPCs可到達(dá)TBI腦損傷部位并參與局部血管新生與組織重建過程，該過程可能是

2、通過激活SDF-1α/CXCR4軸后，趨化CD34+細(xì)胞到達(dá)損傷部位。而輕型TBI尤其是伴有腦組織損傷的輕型TBI患者存在血管相關(guān)損傷。為此，本研究假說(shuō):1.輕型TBI患者存在循環(huán)血EPC的特征性變化;2.外周血SDF-1α、以及不同細(xì)胞群CXCR4表達(dá)水平可以作為輕型TBI患者預(yù)后判斷的特征性生物標(biāo)記。
　　方法:1）臨床共選取TBI患者63例，其中收入輕型組患者53例，中型組患者10例。分別于傷后1d、4d、7d、14d、21

3、d各時(shí)間點(diǎn)采集患者外周血樣本，利用BD FACS ArisTM流式細(xì)胞儀檢測(cè)循環(huán)血EPCs(CD34+/CD133+)及CD34+、CD133+細(xì)胞數(shù)量，并測(cè)定各類細(xì)胞不同時(shí)間點(diǎn)表達(dá)CXCR4百分比變化、平均熒光強(qiáng)度(Mean fluorescence intensity，MFI)值，進(jìn)行分析比較。2）通過患者血液樣本提取血清行ELISA檢測(cè)，觀察傷后SDF-1α表達(dá)情況。保存TBI患者術(shù)中切除挫裂傷額葉腦組織，提取蛋白后行Wester

4、n-blot檢測(cè)，并將部分腦組織切片后行免疫熒光染色，由此觀察創(chuàng)傷后局部SDF-1α/CXCR4軸蛋白表達(dá)情況。3）入組患者均按照擴(kuò)展格拉斯哥預(yù)后評(píng)分量表(Extended Glasgow Outcome Scale，GOS-E)及日常生活能力評(píng)分量表（Activity of Daily Living Scale，ADLS）標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)患者傷后3個(gè)月、6個(gè)月的預(yù)后情況進(jìn)行隨訪觀察，并采用漢密爾頓焦慮量表（Hamilton Anxiety S

5、cale，HAMA）及漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale，HAMD)對(duì)患者傷后心理狀態(tài)進(jìn)行量化評(píng)估。將TBI后流式細(xì)胞儀等相關(guān)監(jiān)測(cè)指標(biāo)同患者預(yù)后恢復(fù)情況進(jìn)行相關(guān)性分析，經(jīng)建立受試者工作特征曲線(Receiver operating characteristic curve，ROC)計(jì)算臨界值，并參照相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率(relative risk，RR)值計(jì)算情況，探尋可反映患者預(yù)后恢復(fù)水平的生物學(xué)標(biāo)記。

6、　　結(jié)果:1）輕型TBI患者傷后外周血EPCs呈現(xiàn)先抑后揚(yáng)的變化特征，第7、14天顯著高于對(duì)照組(p＜0.05)。TBI后CD34+及CD133+細(xì)胞數(shù)量早期即呈現(xiàn)較高水平，并隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降至正常，輕、中型TBI組間各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞數(shù)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。輕型TBI后各類細(xì)胞表達(dá)CXCR4百分比及MFI值早期均處于較高水平，后期逐漸接近至基線水平。其中EPCs表達(dá)CXCR4百分比中型TBI組4、7、14及21天均顯著高于輕型組(

7、p＜0.05)，傷后第7天CD34+、CD133+細(xì)胞及EPCs表達(dá)CXCR4水平輕型預(yù)后不良組（B組）顯著高于預(yù)后良好組（A組）(p＜0.05)。2)經(jīng)Western blot檢測(cè)及免疫熒光染色觀察，TBI后挫傷腦組織局部高表達(dá)SDF-1α/CXCR4;ELISA檢測(cè)觀察，傷后早期血清SDF-1α濃度即顯著增高，中型TBI組1、4天顯著高于輕型TBI組(p＜0.05)，A、B組間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，后期濃度逐漸減低。3）

8、預(yù)后3個(gè)月HAMA及HAMD評(píng)分輕型TBI組低于中型組(P＜0.05)，預(yù)后6個(gè)月同3個(gè)月比較，HAMA及HAMD評(píng)分水平無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，證實(shí)中型TBI患者傷后伴有更為嚴(yán)重的焦慮及抑郁情緒。參照GOS-E及ADLS評(píng)分結(jié)果，經(jīng)Logistic回歸分析得出，循環(huán)血EPC表達(dá)CXCR4百分比7天時(shí)與輕型TBI患者3個(gè)月預(yù)后情況存在顯著相關(guān)(r=0.428，P=0.021)。求得ROC曲線AUC值為0.78，CXCR4百分比

9、臨界值為42.35％，由此計(jì)算得出3個(gè)月預(yù)后不良的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)率(RR)值為2.455。
　　結(jié)論:1）輕中型TBI患者外周血EPCs水平同樣具有先抑后揚(yáng)的變化特點(diǎn)，提示即使較為輕微的腦組織損傷同樣可以有效動(dòng)員骨髓EPCs;2）傷后7天為CD34+、CD133+及EPCs細(xì)胞數(shù)量由高轉(zhuǎn)低的共同時(shí)間轉(zhuǎn)折點(diǎn)，提示該時(shí)間點(diǎn)可能是TBI后神經(jīng)血管修復(fù)的關(guān)鍵時(shí)間點(diǎn);3）相對(duì)于外周血CD34+、CD133+及EPCs細(xì)胞數(shù)量，EPCs表達(dá)CXCR