SDF-1α-CXCR4對大鼠動脈損傷后內(nèi)膜增生的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景: 急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)是冠心病(coronary heart disease,CHD)患者致死致殘的主要原因,經(jīng)皮冠脈內(nèi)支架植入術(shù)(percutaneous coronary intervention,PCI)是拯救患者生命的重要措施,然而PCI術(shù)后較高的狹窄率(約20%)卻限制了其推廣。目前研究認(rèn)為,影響PCI術(shù)后再狹窄的主要因素包括局部動脈損傷和異體炎癥反應(yīng)

2、、血小板聚集和血栓形成、細(xì)胞外基質(zhì)代謝紊亂、血管平滑肌細(xì)胞的移行和增殖、血管內(nèi)皮延遲愈合等,各種因素綜合作用導(dǎo)致血管新生內(nèi)膜增生,最終管腔變小,因此如果能最大限度地抑制新生內(nèi)膜的增生,即能降低PCI術(shù)后再狹窄的發(fā)生率。 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)又稱為趨化因子CXCL12(chemokine ligand12)是化學(xué)趨化因子超家族中的一員,參與調(diào)節(jié)體內(nèi)許多重要的生

3、理過程,其受體CXCR4是一個G蛋白偶聯(lián)的7次跨膜受體,它在體內(nèi)許多組織、器官上均有廣泛表達(dá)。SDF-1基因編碼了3個同源異型體α、β、γ,心肌缺血或血管損傷時,局部SDF-1α表達(dá)增加,吸引外周循環(huán)中CD34+CXCR4+細(xì)胞到達(dá)缺血或損傷部位,參與修復(fù)過程。 目的: 本研究觀察大鼠頸總動脈球囊損傷術(shù)后,SDF-1α及其受體CXCR4在損傷局部的表達(dá)情況,并通過應(yīng)用SDF-1α siRNA或CXCR4受體拮抗劑AMD3

4、100觀察SDF-1α與CXCR4之間的相互作用對損傷血管新生內(nèi)膜形成的影響。 方法: 構(gòu)建SD大鼠頸總動脈球囊損傷模型,體外培養(yǎng)損傷術(shù)后血管平滑肌細(xì)胞及骨髓間充質(zhì)細(xì)胞,應(yīng)用SDF-1α siRNA干預(yù)后,分別于干預(yù)前后應(yīng)用ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中SDF-1α濃度,MTT法檢測細(xì)胞增殖,Transwell Chamber法檢測細(xì)胞遷移,PCR、Western blot法檢測細(xì)胞SDF-1α和CXCR4基因、蛋白的

5、表達(dá);體內(nèi)實驗在構(gòu)建SD大鼠頸總動脈球囊損傷模型后,應(yīng)用CXCR4受體拮抗劑AMD3100干預(yù),檢測干預(yù)前后血漿SDF-1α濃度,外周血循環(huán)中CD34+CXCR4+細(xì)胞數(shù)量,組織中SDF—1α,和CXCR4基因、蛋白的表達(dá),并應(yīng)用免疫組化法檢測干預(yù)前后損傷血管內(nèi)膜上CXCR4的表達(dá)情況。 結(jié)果: (一)體外實驗: 1.SD大鼠頸總動脈球囊損傷術(shù)后,在體外培養(yǎng)的損傷平滑肌細(xì)胞中,SDF-1α的基因表達(dá)增加,細(xì)胞培養(yǎng)

6、上清液中的SDF-1α濃度亦升高;應(yīng)用SDF-1α siRNA干預(yù)后,損傷平滑肌細(xì)胞中SDF-1α的基因表達(dá)受到抑制,細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的SDF-1α濃度亦減少; 2.體外培養(yǎng)的損傷后血管平滑肌細(xì)胞對骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的趨化能力增強(qiáng);應(yīng)用SDF-1α siRNA干預(yù)后,損傷平滑肌細(xì)胞對骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的趨化能力受到抑制;應(yīng)用AMD3100干預(yù)后,損傷平滑肌細(xì)胞對骨髓間充質(zhì)細(xì)胞的趨化能力亦減弱; 3.體外培養(yǎng)的損傷后骨髓間充質(zhì)細(xì)胞

7、對SDF-1α的遷移能力增加;應(yīng)用SDF-1α siRNA或AMD3100干預(yù)后,骨髓間充質(zhì)細(xì)胞對SDF-1α的遷移能力受到了抑制; (二)體內(nèi)實驗: 1.SD大鼠頸總動脈球囊損傷術(shù)后,血漿SDF-1α水平增加,在術(shù)后24h達(dá)到高峰,術(shù)后7d回復(fù)基礎(chǔ)水平;外周血循環(huán)中CD34+CXCR4+細(xì)胞數(shù)目增加; 2.在損傷的頸總動脈組織中,SDF-1α和CXCR4的基因和蛋白表達(dá)增加,SDF-1α的表達(dá)在術(shù)后1d達(dá)峰值,

8、而CXCR4的基因和蛋白表達(dá)則隨時間逐漸增強(qiáng); 3.當(dāng)應(yīng)用CXCR4受體拮抗劑AMD3100干預(yù)時,外周血循環(huán)中血漿SDF-1α水平不受影響;CD34+CXCR4+細(xì)胞數(shù)目在術(shù)后即刻增加,其它時間點不受影響; 4.免疫組化發(fā)現(xiàn),損傷的頸總動脈內(nèi)膜在術(shù)后1d即有CXCR4受體的表達(dá),隨后逐漸增強(qiáng);應(yīng)用了AMD3100拮抗后,內(nèi)膜中CXCR4陽性反應(yīng)在術(shù)后4d才出現(xiàn),且反應(yīng)較弱。 結(jié)論: 在血管損傷時,平滑肌

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