量子點(diǎn)應(yīng)用于腫瘤表面糖蛋白與免疫系統(tǒng)作用的研究.pdf

1、腫瘤細(xì)胞膜糖蛋白作為影響腫瘤細(xì)胞信號(hào)傳遞、免疫原性的關(guān)鍵分子，與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展有著極為密切的聯(lián)系。腫瘤細(xì)胞膜糖蛋白的過(guò)量表達(dá)、缺失或結(jié)構(gòu)改變，直接影響腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)移、免疫逃逸。
　　 本論文通過(guò)兩種方法分離小鼠肺腺癌細(xì)胞LA795細(xì)胞膜表面的糖蛋白，并制備糖蛋白-量子點(diǎn)熒光納米顆粒，以實(shí)現(xiàn)在活體中對(duì)糖蛋白與免疫系統(tǒng)的相互作用進(jìn)行熒光示蹤。第一種方法分離天然的腫瘤細(xì)胞膜糖蛋白。具體為利用親和素對(duì)糖基的親合作用，以親和層析

2、的方法提取含有葡萄糖及甘露糖的糖蛋白。第二種方法分離得到經(jīng)過(guò)代謝標(biāo)記的糖蛋白。首先合成含疊氮甘露糖，對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行代謝標(biāo)記，然后通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)分離出腫瘤細(xì)胞膜表面的糖蛋白。
　　 同時(shí)，自行合成了量子點(diǎn)熒光納米顆粒。量子點(diǎn)是熒光性能極好的納米顆粒，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)活體較深部位的成像，并且穩(wěn)定、不易淬滅。利用巰基乙酸作穩(wěn)定劑合成水溶性CdSe/ZnS核殼型量子點(diǎn)熒光納米晶體，粒子尺寸均勻、熒光穩(wěn)定。隨后，通過(guò)酰胺反應(yīng)制備糖蛋白-量子點(diǎn)

3、熒光探針進(jìn)行活體成像實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，糖蛋白-量子點(diǎn)熒光納米顆粒在小鼠淋巴結(jié)處聚集，在活體水平證實(shí)了腫瘤細(xì)胞膜糖蛋白的抗原特性。其后，進(jìn)行的細(xì)胞因子表達(dá)芯片實(shí)驗(yàn)也表明注射絡(luò)合物的小鼠體IL-6，IL-12，IFNγ等細(xì)胞因子的表達(dá)成升高趨勢(shì)，而這些正是與腫瘤免疫相關(guān)的細(xì)胞因子。這個(gè)結(jié)果驗(yàn)證了此糖蛋白-量子點(diǎn)熒光探針系統(tǒng)用于研究腫瘤細(xì)胞糖蛋白與免疫系統(tǒng)相互作用的有效性。
　　 此外，在本論文中將量子點(diǎn)用于腫瘤細(xì)胞靶向成像中。合成Cd

4、Se/zns量子點(diǎn)，并與透明質(zhì)酸偶聯(lián)，得到透明質(zhì)酸.量子點(diǎn)絡(luò)合物。借助CD44受體-透明質(zhì)酸的相互識(shí)別，實(shí)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞的靶向性成像。
　　 綜上所述，本研究成功利用量子點(diǎn)一糖蛋白熒光探針系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)大分子與免疫系統(tǒng)相互作用的活體水平的觀察，并通過(guò)細(xì)胞因子芯片實(shí)驗(yàn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行了印證。腫瘤細(xì)胞膜糖蛋白具有抗原特性，為進(jìn)一步研究糖蛋白介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)移、免疫逃逸奠定了一定基礎(chǔ)，并為開發(fā)新型抗腫瘤藥物、腫瘤疫苗提供新的思路。