赤松外生菌根菌及根際土壤微生物多樣性研究.pdf

1、赤松（Pinus densiflora）高大的喬木，能形成外生菌根。外生菌根菌中大部分是食用菌，松茸就是其中的一種。但遺憾的是到目前為止松茸尚且不能進行人工栽培，松茸與赤松是互惠共生關(guān)系，松茸的生長與赤松根際土壤微生物有密切關(guān)系。本實驗采用DGGE，基因克隆及構(gòu)建基因文庫的方法對松茸子實體及赤松根際土壤微生物進行分析，為研究松茸與赤松的共生關(guān)系提供理論依據(jù)。研究的結(jié)果如下：
　　1、通過對赤松根際土壤微生物 PCR反應(yīng)體系進行優(yōu)化

2、，確定了最佳的反應(yīng)體系。即25 uL體系中包含模板 DNA10ng，dNTPs0.15 mM，上下游引物各3.2uM，Taq酶2U，Mg2+1.0mM。并篩選出最佳的引物ITS1F(GC)-ITS2341F(GC)-518R。
　　2、通過對松茸子實體及赤松根際土壤微生物進行 PCR-DGGE，可知松茸子實體有細菌入侵，赤松外生菌根菌及根際土壤微生物具有多樣性。
　　3、通過對DGGE條帶切膠得到25個條帶，對條帶進行克隆、

3、測序、BLAST比對，確定松茸子實體及赤松根際土壤中有8種真菌，分別是Hypocrea sp.(肉座菌屬)、Tricholoma matsutake sp.(松茸菌屬)、Cenococcum geophilum sp.(土生空團菌屬)、Russula sp.(紅菇菌屬)、Inocybe sp.(絲蓋傘菌屬)、Dothideomycetes sp.(座囊菌屬)、Cortinarius sp.(絲膜菌屬)、Ascomycete sp.(子囊