甘蔗遺傳轉(zhuǎn)化中的pmi篩選標(biāo)記及其安全性評(píng)價(jià).pdf

1、本研究以pmi基因作為篩選標(biāo)記基因，以甘露糖作為篩選劑，通過(guò)基因槍轟擊遺傳轉(zhuǎn)化甘蔗，并研究其對(duì)甘蔗糖代謝的影響，同時(shí)通過(guò)轉(zhuǎn)基因甘蔗的田間種植，評(píng)價(jià)其安全性。研究結(jié)果表明：在基因槍介導(dǎo)的甘蔗福農(nóng)95-1702遺傳轉(zhuǎn)化篩選體系中，pmi/甘露糖篩選體系的甘露糖與蔗糖的配比為7:3為最適合碳源配比，轉(zhuǎn)化效率達(dá)7.4％：經(jīng)過(guò)PCR、RT-PCR、Northern雜交等分子檢測(cè)證實(shí)pmi基因已整合到甘蔗基因組，并測(cè)得蛋白表達(dá)量；轉(zhuǎn)基因甘蔗葉片的的

2、糖代謝分析結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因甘蔗已糖激酶的酶活性在甘蔗不同生育期均表現(xiàn)顯著上升，丙酮酸激酶的酶活性均顯著下降，而蔗糖合成途徑的三個(gè)關(guān)鍵酶酶活性只在甘蔗的成熟期表現(xiàn)顯著的變化，說(shuō)明pmi基因影響甘蔗糖代謝相關(guān)酶類(lèi)的酶活性；而土壤微生物平板培養(yǎng)和土壤酶活性分析結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)基因甘蔗對(duì)土壤環(huán)境包括土壤微生物總量和土壤的主要酶類(lèi)不產(chǎn)生顯著的影響。綜合以上分析結(jié)果，認(rèn)為pmi基因用于甘蔗的遺傳轉(zhuǎn)化是可行的、對(duì)環(huán)境是安全的，對(duì)甘蔗自身生長(zhǎng)和糖代謝也沒(méi)有