基于形態(tài)與分子技術(shù)相結(jié)合的葉螨鑒定法研究.pdf

1、葉螨屬于節(jié)肢動(dòng)物門(mén)（Arthropoda）、蛛形綱(Arachinida)、蜱螨亞綱（Acari）、真螨總目（Acariformes）、絨螨目（Trombidiformes）、前氣門(mén)亞目（Prostigmata）、異氣門(mén)總股（Eleutherengonides）、葉螨科(Tetranychidae)，是一種危害蔬菜、果樹(shù)、豆科植物和觀賞性植物的重要農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)。在實(shí)行植物檢疫過(guò)程中，由于不同種類(lèi)葉螨的形態(tài)特征相似度高，因而往往找不到好的鑒別

2、特征。一般來(lái)說(shuō)，葉螨屬的葉螨主要是通過(guò)雄蟲(chóng)外生殖器陽(yáng)具端錘的性狀來(lái)進(jìn)行鑒定，但是形態(tài)學(xué)鑒定局限于特定的發(fā)育階段，且對(duì)于親緣關(guān)系較近的物種或隱存種區(qū)分困難。例如二斑葉螨(Tetranychusurticae Koch)和朱砂葉螨（Tetranychus cinnabarinus Boisduval）具有非常相似的形態(tài)特征，在傳統(tǒng)葉螨分類(lèi)研究中常引起分類(lèi)學(xué)家的意見(jiàn)分歧。
　　為了解決形態(tài)學(xué)鑒定問(wèn)題，越來(lái)越多的分子標(biāo)記技術(shù)被應(yīng)用于蜱螨鑒

3、定。其中限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)(PCR-RFLP)被認(rèn)為是有效區(qū)分葉螨屬種類(lèi)的鑒定手段?；贒NA序列差異的葉螨鑒定方法相對(duì)于傳統(tǒng)鑒定方法而言，具有便捷、快速、穩(wěn)定等特點(diǎn)，其中核糖體DNA應(yīng)用較為廣泛。核糖體DNA主要包括18S、5.8S和28S rRNA及內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS1和ITS2。由于ITS序列具有種內(nèi)變異小，種間變異大的特性，為葉螨屬鑒定提供了更為可靠的分子標(biāo)記。
　　本研究通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的

4、鑒定手段，對(duì)不同寄主、地理區(qū)域的葉螨種類(lèi)進(jìn)行了鑒定。旨在探索兩項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合是否可以對(duì)葉螨屬內(nèi)6個(gè)物種（盧氏葉螨Tetranychus ludeni、豆葉螨Tetranychus phaselus、神澤氏葉螨Tetranychus kanzawai,二斑葉螨Tetranychus urticae、截形葉螨Tetranychus truncatus和皮氏葉螨Tetranychuspiercei）進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定。另外，我們檢測(cè)和分析了種間ITS

5、序列的差異，綜合考慮DNA多態(tài)性及酶切片段特異性等特點(diǎn)，最終篩選到3個(gè)限制性?xún)?nèi)切酶(RsaI、DdeI、MfeI)用于建立RFLP圖譜。
　　研究表明兩項(xiàng)技術(shù)的結(jié)合能夠準(zhǔn)確鑒定出這6個(gè)物種，且基于ITS構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育分析結(jié)果也支持了形態(tài)上鑒定的種，除了外群柑橘全爪螨和桑全爪螨處于同一進(jìn)化支上，其他物種都以較高的置信度形成一個(gè)單系，而且ITS序列在種間顯示出較高的多態(tài)性，即該基因在葉螨鑒定方面突顯出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。綜上所述，分子鑒定方法