菜粉蝶提取物誘導(dǎo)黃瓜對(duì)炭疽病的抗性及其機(jī)理研究.pdf

1、本試驗(yàn)測定了37種植物和4種昆蟲的80％乙醇提取物誘導(dǎo)黃瓜對(duì)炭疽病的抗病效果，在此基礎(chǔ)上構(gòu)建了菜粉蝶提取物誘導(dǎo)黃瓜抗炭疽病的技術(shù)體系，探討了菜粉蝶提取物誘導(dǎo)黃瓜抗炭疽病的生理生化機(jī)制，并利用DDRT-PCR技術(shù)對(duì)經(jīng)菜粉蝶提取物誘導(dǎo)處理后接種炭疽病菌黃瓜葉片的基因表達(dá)進(jìn)行了分析，對(duì)可能與誘導(dǎo)黃瓜抗炭疽病相關(guān)的差異表達(dá)基因片段進(jìn)行回收、克隆和測序，為最終克隆這些基因、研究其功能奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1．發(fā)現(xiàn)了菜粉蝶提取物可誘導(dǎo)黃

2、瓜對(duì)黃瓜炭疽病產(chǎn)生局部抗性和系統(tǒng)抗性。 2．建立了適合菜粉蝶提取物免疫誘導(dǎo)黃瓜抗炭疽病的技術(shù)體系。 ①最佳誘導(dǎo)方法為葉面噴霧法。 ②菜粉蝶提取物的最佳有效處理濃度為5.0 mg/mL。 ③誘導(dǎo)抗性表達(dá)的最佳誘導(dǎo)間隔期為3 d。 ④有效誘導(dǎo)次數(shù)為1次。 ⑤最佳誘導(dǎo)處理時(shí)期為黃瓜幼苗二葉一心期。 3．黃瓜葉片經(jīng)菜粉蝶提取物誘導(dǎo)后各種防御酶活性較空白對(duì)照均有所升高，過氧化物酶活性于誘導(dǎo)后

3、第5天達(dá)高峰值38.9(△OD/g·min)，多酚氧化酶活性于誘導(dǎo)后第4天達(dá)高峰值28.3(0.001 △OD/g·s)，苯丙氨酸解氨酶活性于誘導(dǎo)后第3天達(dá)高峰值56.4(0.01△OD/g·min)，超氧化物歧化酶活性于誘導(dǎo)后第2天達(dá)高峰值50.3(抑制率/g)。 4．菜粉蝶提取物誘導(dǎo)處理對(duì)黃瓜葉片的脯氨酸、丙二醛含量變化沒有明顯影響。 5．菜粉蝶提取物誘導(dǎo)處理可直接誘導(dǎo)黃瓜處理葉片或系統(tǒng)葉片積累病程相關(guān)蛋白(PRs，

4、)，如再用炭疽病菌挑戰(zhàn)接種，PRs在黃瓜植株中的積累會(huì)更加明顯。 6．用3個(gè)錨定引物、26個(gè)隨機(jī)引物的引物組合對(duì)經(jīng)菜粉蝶提取物誘導(dǎo)處理后接種炭疽病菌和只接種炭疽病菌的黃瓜葉片進(jìn)行DDRT-PCR擴(kuò)增，經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染檢測，共獲得67條差異表達(dá)基因片段，對(duì)其進(jìn)行回收，回收成功率為89.6％。挑選其中5個(gè)差異片段進(jìn)行克隆、測序，并進(jìn)行同源性分析，結(jié)果表明D1片段序列(344bp)與來自葉綠體psbB基因編碼的47kD蛋白結(jié)