益母草堿—半胱氨酸類似物的綴合物的合成及其心肌保護(hù)作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：中藥益母草中的有效成分益母草堿和半胱氨酸類似物均已被證實(shí)具有心臟保護(hù)作用。鑒于兩者良好的藥理活性,本研究以二者為先導(dǎo)化合物,設(shè)計(jì)并合成了一系列益母草堿-半胱氨酸類似物的綴合物,比較益母草堿與不同的半胱氨酸類似物的綴合物對(duì)心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,篩選優(yōu)勢(shì)候選化合物,并探討其對(duì)缺血性損傷心肌細(xì)胞的抗氧化和抗凋亡作用,進(jìn)一步闡明其作用機(jī)制,為臨床有效治療缺血性心臟病研發(fā)新藥提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：第1部分:以丁香酸為起始原料,依

2、次經(jīng)過(guò)羰基化反應(yīng),酯化反應(yīng)和酯的水解等反應(yīng),合成得到益母草堿與半光氨酸類似物相結(jié)合的綴合物,并采用MS、NMR和HRMS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定,采用HPLC對(duì)新化合物的純度進(jìn)行分析。第2部分:以原代乳鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象,分為常氧處理組、缺氧模型組、益母草堿-半胱氨酸類似物的綴合物處理組。MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率,比色法檢測(cè)培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、細(xì)胞上清液H2S濃度及運(yùn)用Hoechst染色

3、觀察細(xì)胞形態(tài)。第3部分:以原代乳鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象,分為常氧處理組、缺氧模型組、新化合物1a處理組。比色法檢測(cè)超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)、活性氧物質(zhì)(ROS)、脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物(MDA)和凋亡相關(guān)因子Caspase-3活性;采用RT-PCR方法觀察bcl-2、bax、caspase-3及胱硫醚-γ-裂解酶(cystathione-γ-lyase,CSE)mR

4、NA的表達(dá);采用Western Blot方法觀察Bcl-2、Bax、Caspase-3、CSE、Akt的表達(dá);Annexin V-FITC/PI雙染觀察凋亡變化;采用JC-1染色法觀察線粒體膜電位的變化;采用透射電鏡的方法觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　結(jié)果：第1部分:設(shè)計(jì)并合成一系列益母草堿-半胱氨酸衍生物的綴合物,并經(jīng)MS、NMR和HRMS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行確認(rèn),HPLC純度分析結(jié)果表明新化合物的純度符合實(shí)驗(yàn)要求。第2部分:新化合

5、物1a、1b和2具有心肌細(xì)胞的保護(hù)作用,其中1a的藥理活性優(yōu)于1b和2;新化合物1a與其前體化合物益母草堿和SPRC比較,其用藥濃度為益母草堿的1/10和SPRC的1/100,表明新化合物1a的效價(jià)優(yōu)于其前體化合物。新化合物1a能提高缺氧心肌細(xì)胞的存活率、降低心肌細(xì)胞LDH的漏出率,上調(diào)H2S的含量。第3部分:新化合物1a能提高心肌細(xì)胞內(nèi)SOD、CAT酶的活性,降低ROS和MDA的含量;上調(diào)bcl-2基因和蛋白的表達(dá),下調(diào)bax和cas