鼠尾草酸對四氯化碳誘導(dǎo)肝細胞損傷的作用研究.pdf

1、研究目的:
　　 鼠尾草酸(CA)是一種天然、強效的抗氧化劑,具有多種藥理和生物活性,但尚無對肝臟保護作用的研究。本研究通過分別建立CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝損傷模型和正常人肝細胞損傷模型的基礎(chǔ)上,系統(tǒng)地觀察了CA對肝細胞的保護作用,并初步探討了其機制是否與抑制脂質(zhì)過氧化和炎癥因子生成有關(guān)。
　　 研究方法:
　　 本研究分為二個部分:在體動物實驗和體外細胞實驗:
　　 (1)動物實驗:按0.7 ml/100g

2、體重劑量,SD大鼠1次性腹腔注射10％CCl4色拉油混懸液。實驗分為6組:正常對照組,腹腔注射等體積生理鹽水;CCl4肝損傷模型組:灌胃給予等體積雙蒸水,連續(xù)4天,然后腹腔注射10％CCl4色拉油混懸液;CA處理組:在CCl4造模前大鼠每日分別灌胃給予不同劑量CA,劑量分別為25、50和100 mg/kg,連續(xù)4天;陽性對照藥聯(lián)苯雙酯(BD,100 mg/kg),在CCl4造模前大鼠每日分別灌胃給予BD(100 mg/kg),劑量100

3、mg/kg,連續(xù)4天。CCl4處理后24 h取血檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性以及白介素-6(IL-6)水平。實驗結(jié)束后,處死動物后取其肝臟進行病理觀察和檢測肝組織勻漿MDA含量。
　　 (2)細胞實驗:培養(yǎng)L-02人正常肝細胞株。實驗設(shè)正常對照組,CCl4模型組(加入60％飽和濃度的CCl4 RPMI1640培養(yǎng)液);CA處理組,在CCl4造模前1 h加入不同劑量CA,濃度分別為5、10和25μg/ml;陽

4、性對照藥BD(25μg/m1)組,在CCl4造模前1h加入BD,濃度為25μg/ml。加入CCl4后繼續(xù)培養(yǎng)6 h,MTT法測定細胞存活率,收集培養(yǎng)上清液檢測ALT和AST活性以及IL-6水平,測定細胞中MDA含量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)動物實驗:正常SD大鼠血漿轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST活性分別為49.6±7.9和182.4±19.8 U/L。腹腔注射CCl4后,血中ALT和AST活性顯著升高,24 h后分別達到124

5、3.1±325.4和795.4±94.3 U/L。正常SD大鼠血漿IL-6水平和肝組織勻漿MDA分別為210.8±57.4 ng/ml和0.77±0.08 nmol/mg。腹腔注射CCl4后IL-6水平和MDA含量顯著增加,分別達到392.5±71.3 ng/ml和2.46±0.73 nmol/mg。上述指標與正常對照組比較均具有顯著性差異(P＜O.01)。在CCl4造模前大鼠灌胃給予三個不同劑量的CA,能不同程度地減輕CCl4誘導(dǎo)的大

6、鼠血漿ALT和AST活性升高、降低血漿IL-6水平和肝組織勻漿MDA含量(ALT分別為788.9±124.6,456.7±98.5,234.8±79.7 U/L;AST分別為525.54±112.5,351.3±76.9,276.5±69.4 U/L;IL-6分別為324.8±61.7,265.8±31.8,239.0±51.4ng/ml:MDA含量分別為1.63±0.51,0.98±0.75,0.85±0.62 nmol/ml)。同時

7、,病理組織學結(jié)果顯示,在CCl4造模前大鼠每日分別灌胃給予三個不同劑量的CA,能不同程度地保護CCl4誘導(dǎo)的肝組織損傷。
　　 (2)細胞實驗:CA(25μg/ml)和BD(25μg/ml)均對正常人肝細胞株L-02存活率無明顯影響。加入CCl4培養(yǎng)6 h后,肝細胞存活率顯著降低,達到78.5±4.3％,與正常對照組比較具有顯著性差異(P＜0.01)。在加入CCl4損傷前1 h分別加入三個濃度的CA能不同程度地減少CCl4誘導(dǎo)的

8、肝細胞存活率降低(肝細胞存活率分別為84.9±4.1,90.1±3.2,97.4±6.8)。正常人肝細胞株L-02培養(yǎng)液ALT和AST活性分別為32.1±l1.3和59.6±12.1U/L,IL-6水平和MDA含量分別為412.5±61.4 ng/ml和4.10±1.80nmol/ml。加入CCl4培養(yǎng)6 h后,肝細胞培養(yǎng)液ALT和AST活性顯著升高,分別達到186.8±25.1和141.2±27.8 U/L,同時IL-6水平和MDA含

9、量顯著增加,達到798.6±45.8 ng/ml和17.54±4.36nmol/ml。上述指標與正常對照組比較均具有顯著性差異(P＜0.01)。在加入CCl4損傷的同時分別給予三個濃度的CA能不同程度的減輕CCl4誘導(dǎo)的ALT和AST活性升高,IL-6水平和MDA含量增加(ALT分別為104.9±23.3,63.7±14.5,53.9±9.6 U/L;AST分別為125.3±20.4,85.5±14.2,64.9±11.4 U/L;IL