中藥復(fù)方清肝排毒飲抗乙肝病毒和實(shí)驗(yàn)性肝損傷的藥效學(xué)研究.pdf

1、研究目的:通過體內(nèi)外抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)研究，評價(jià)中藥復(fù)方清肝排毒飲抗乙肝病毒的作用效果；通過抗免疫性肝損傷和化學(xué)性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究，評價(jià)該復(fù)方對實(shí)驗(yàn)性肝損傷的保護(hù)作用效果并探討其作用機(jī)制，為清肝排毒飲應(yīng)用于臨床治療慢性乙型肝炎進(jìn)一步提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容: 1、復(fù)方清肝排毒飲對小鼠的急性毒性試驗(yàn)在小鼠急性毒性試驗(yàn)研究，我們通過記錄動(dòng)物中毒表現(xiàn)及死亡情況，測定不同濃度的清肝排毒飲對小鼠的毒副作用，從而確定試驗(yàn)的劑量范圍。結(jié)果

2、顯示，復(fù)方清肝排毒飲80g/kg/d劑量可能對小鼠影響較大，而40g/kg/d劑量下對小鼠可能影響較小，故本課題以下實(shí)驗(yàn)所用劑量均在40g/kg/d劑量范圍以下進(jìn)行。 2、復(fù)方清肝排毒飲體內(nèi)外抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)研究 在體內(nèi)抗DHBV的實(shí)驗(yàn)研究中，選擇由先天感染性鴨乙肝病毒為模型。分別于T<,0>、T<,5>、T<,10>、P<,3>各時(shí)間點(diǎn)采血，分離血清，用斑點(diǎn)雜交法測定血清中DHBV的載量變化。結(jié)果顯示，清肝排毒飲大、中劑

3、量組均有不同程度抑制DHBV DNA作用，與拉米夫定組相比較無顯著差異性，停藥后反跳不明顯。 在體外抗HBV的實(shí)驗(yàn)研究中，采用2.2.15細(xì)胞模型，以HBsAg、HBeAg作為藥物效果檢測指標(biāo)，并用MTT法檢測藥物細(xì)胞毒性。結(jié)果顯示，清肝排毒飲對2.2.15細(xì)胞的半數(shù)毒性濃度(TC<,50>為>40.23mg/mL。復(fù)方清肝排毒飲對HBsAg，HBeAg的半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)分別為<27.75mg/mL和54.42mg

4、/mL；治療指數(shù)(TI)分別為>1.45和>0.74，顯示清肝排毒飲在體外無顯著的直接抑制乙肝病毒復(fù)制的作用。 3、復(fù)方清肝排毒飲體內(nèi)抗免疫性肝損傷和化學(xué)性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究 體內(nèi)抗免疫性肝損傷作用研究采用刀豆蛋白A(Con A)所誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型，用清肝排毒飲大、小劑量組(40g/kg，20g/kg)進(jìn)行治療，并與聯(lián)苯雙酯治療組為對照，檢測小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和γ-干擾素(I

5、FN-γ)含量，觀察肝組織病理改變。清肝排毒飲大劑量組小鼠ALT活性、IFN-γ和TNF-α含量均明顯低于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，但與聯(lián)苯雙酯組比較，差異無顯著性意義(P>0.05)；清肝排毒飲大劑量組肝臟病理改變明顯減輕。表明清肝排毒飲對Con A所致小鼠肝損傷具有較好的保護(hù)作用，抑制T淋巴細(xì)胞活化和IFN-γ、TNF-α的釋放是其主要的作用機(jī)制。 體內(nèi)抗化學(xué)肝損傷作用研究采用醋氨酚所導(dǎo)致的小鼠肝損傷模型，用

6、清肝排毒飲大、中、小劑量組(80g/Kg， 40g/kg，20g/kg)進(jìn)行治療，并與聯(lián)苯雙酯治療組對照，檢測小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)水平，觀察肝組織病理改變。清肝排毒飲大、中劑量組能顯著抑制小鼠血清ALT，升高SOD、GSH水平，與模型組比較，差異有顯著性意義(P<0.05)，但與聯(lián)苯雙酯組比較，差異無顯著性意義(P>0.05)；清肝排毒飲大、中劑量組肝臟病理改變明顯減輕。表明清肝排