赤芍總苷抗實驗性肝損傷和抗乙型肝炎病毒的藥效學研究.pdf

1、我國的中藥資源十分豐富，一些傳統(tǒng)的中藥方劑對慢性乙型肝炎具有肯定的療效，而且毒副作用輕，是有待開發(fā)的理想藥物，尤其是單味中藥。經過多年臨床觀察、反復篩選、不斷優(yōu)化，本研究選用從赤芍中提取的赤芍總苷，擬將其開發(fā)為新一代的抗肝損傷和抗乙肝病毒的中藥新藥。 1.研究目的： 1.1采用D一氨基半乳糖(D-GalN)和刀豆蛋白A(COn A)所致肝損傷的動物模型研究赤芍總苷的保肝降酶及抗氧化作用。 1.2在體內外觀察赤芍總

2、苷抗乙肝病毒作用。 2.實驗步驟 2.1赤芍總苷抗D-氨基半乳糖(D-GalN)所致的肝損傷作用。 2.2赤芍總苷抗Con A所致的肝損傷作用。 2.3赤芍總苷體內抗鴨乙肝病毒的實驗研究。 2.4赤芍總苷體外抗乙肝病毒的實驗研究。 3.實驗方法 3.1 NIH小鼠60只，隨機分5組，分別為正常對照組，模型組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙酯組，赤芍總苷高劑量組、低劑量組和聯(lián)苯雙

3、酯組小鼠分別灌胃給藥，1次/d，連續(xù)7d，末次給藥1h后，除正常對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射D-GalN800mg/Kg，16h后采血，檢測血清ALT、AST活性及超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量，并觀察肝組織病理學變化。 3.2 50只NIH小鼠隨機分為5組，分別為正常對照組、模型組、赤芍總苷高劑量組(20mg/kg)、赤芍總苷低劑量組(10mg/kg)和聯(lián)苯雙酯治療組。除正常對照組外，其他組于實驗首日靜

4、脈注射Con A20mg/kg后，赤芍總苷高劑量組、低劑量組、聯(lián)苯雙酯組分別以20mg/kg、10mg/kg、150mg/kg灌胃口服，每天1次，連續(xù)3d，末次給藥后4h，再次靜脈注射Con A 20mg/kg，8h后檢測血漿ALT、AST活性和TNF-α含量，觀察肝組織病理學變化。 3.3 將先天感染鴨隨機分為4組，每組6-7只不等，分別為病毒對照組，ACV組，赤芍總苷高劑量組、赤芍總苷低劑量組。赤芍總苷以20mg.kg、10

5、mg/kg灌胃：ACV按100mg/kg灌胃，共10天。對照組未做處理。分別于T<,0>、T<,5>、T<,10>、P<,3>各時間點采血，用斑點雜交法測定血清中DHBV的載量變化。 3.4 用2.2.15細胞作為細胞模型，將赤芍總苷分為7個劑量組，上藥6d后用ELISA法測定細胞培養(yǎng)上清中的HBeAg和HBsAg含量，并用MTT法測定藥物對細胞的毒性，計算赤芍總苷的治療指數。 4.實驗結果 4.1赤芍總苷高劑量

6、組能顯著降低D-GalN所致小鼠肝損傷血清ALT、AST活性，提高肝組織勻漿SOD活性，降低MDA，明顯改善肝組織損傷的程度，與模型組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 4.2赤芍總苷高劑量組小鼠ALT活性、AsT活性和TNF-α含量均明顯低于模型組，差異有顯著性意義(P<0.05)，但與聯(lián)苯雙酯組比較，差異無顯著性意義(P>0.05)；赤芍總苷高劑量組肝臟病理改變明顯減輕。 4.3赤芍總苷高劑量組在給藥第l0d時血

7、清DHBV DNA含量有顯著性下降(P<0.01)；在停藥后第3d，赤芍總苷高劑量組血清DHBV DNA含量又有回升，與對照組現(xiàn)比，P>0.05；說明赤芍總苷在給藥第lOd在體內有抑制DHBV作用，但是停藥后有反跳現(xiàn)象。 4.4赤芍總苷作用于2.2.15細胞株6d后，對2.2.15細胞株的半數毒性濃度為0.17 mg/L，對HBsAg的半數抑制濃度為0.15 mg/L、對HBeAgI~半數抑制濃度為0.06mg/L；對HBsAg

8、治療指數為1.12，對HBeAg治療指數為2.75。 5.結論： 5.1赤芍總苷對D-Ga1N誘導的小鼠肝損傷有保護作用，其作用機制可能與抗氧自由基的損傷有關。 5.2赤芍總苷對Con A所致小鼠肝損傷具有較好的保護作用，抑制T淋巴細胞活化和TNF-α的釋放是其主要的作用機制。 5.3赤芍總苷具有體內抗鴨乙肝病毒的作用，但在停用后DHBV DNA含量回升。 5.4赤芍總苷在體外細胞培養(yǎng)中對HBsA