雙向固態(tài)發(fā)酵附桂骨痛復(fù)方化學(xué)成分的研究及HPLC指紋圖譜的建立.pdf

1、中藥是中國(guó)的傳統(tǒng)藥物，有上千年的應(yīng)用歷史，療效確切，毒副作用低，受到世界的廣泛關(guān)注。但是其有效成分提取分離和質(zhì)量控制一直是中藥研究以及生產(chǎn)應(yīng)用中難以解決的關(guān)鍵問(wèn)題。指紋圖譜技術(shù)是近年來(lái)出現(xiàn)的中藥質(zhì)量控制的新方法，該法提供的信息量大，可以反映中藥的整體性和模糊性，是對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行有效控制的可行性方法之一。
　　 附桂骨痛復(fù)方(Fugui Gutong Decotion,FGD)取《金匱要略》烏頭湯之精華，用于治療陽(yáng)虛寒濕型頸椎及膝

2、關(guān)節(jié)增生性關(guān)節(jié)炎，臨床試驗(yàn)有效率達(dá)95％。但目前主要存在兩方面的問(wèn)題，一是提取工藝不甚合理，導(dǎo)致有效成分溶出率較低，二是質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制存在欠缺，只對(duì)其中的單味藥進(jìn)行監(jiān)測(cè)，仍舊沒(méi)有對(duì)整個(gè)復(fù)方進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。
　　 本文從這兩方面不足為入手點(diǎn)，優(yōu)選出有效的復(fù)方提取工藝，并初步探索了其復(fù)方的指紋圖譜。具體研究分三個(gè)部分，旨在研究復(fù)方提取工藝的改進(jìn)，以及提取工藝對(duì)川烏、附子中有毒生物堿的影響，并建立HPLC復(fù)方指紋圖譜，為其提取工藝做

3、出質(zhì)量保證。
　　 第一部分的目的是優(yōu)選出最佳的復(fù)方提取工藝。通過(guò)比較傳統(tǒng)煎煮、纖維素酶預(yù)處理、固態(tài)發(fā)酵預(yù)處理法，其中固態(tài)發(fā)酵選用的菌種為真菌微生物A。應(yīng)用高效液相色譜測(cè)定提取液中阿魏酸、芍藥苷含量，并用酸性染料比色法測(cè)定總生物堿的含量，最后優(yōu)選出固態(tài)發(fā)酵法為整個(gè)復(fù)方的最佳提取工藝，并做出成本分析。由于要考慮到復(fù)方中川烏和附子中有毒生物堿含量在發(fā)酵中的變化，第二部分又著重研究了固態(tài)發(fā)酵對(duì)川烏和附子中烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的影

4、響，采用高效液相色譜法測(cè)定其含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明川烏和附子經(jīng)過(guò)固態(tài)發(fā)酵，三種生物堿含量明顯降低。第三部分為復(fù)方指紋圖譜的建立。本文首次對(duì)附桂骨痛復(fù)方進(jìn)行了HPLC色譜指紋圖譜的研究，并進(jìn)行方法學(xué)的考察，結(jié)果表明各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均符合指紋圖譜分析技術(shù)要求，藥材中主要特征峰均在提取液色譜圖中得到體現(xiàn)。在建立、分析、評(píng)價(jià)指紋圖譜的過(guò)程中，采用了相對(duì)保留時(shí)間、相對(duì)峰面積、相似度等參數(shù)，采用藥典委員會(huì)的色譜指紋圖譜處理軟件，以相關(guān)系