丙泊酚對(duì)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞增殖和遷移的調(diào)控.pdf

1、目的：
　　觀察丙泊酚對(duì)懷孕15天(E15)大鼠大腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)增殖和遷移的影響并探討問(wèn)題其可能機(jī)制。
　　方法：
　　1、分離E15天SD大鼠大腦皮層進(jìn)行神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。以(1-2)*106/ml細(xì)胞密度接種，在含有2％ B27，20ng/ml bFGF，20ng/ml EGF的DMEM/F12的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并穩(wěn)定傳至第三代。用Nestin細(xì)胞免疫化學(xué)染色法鑒定神經(jīng)干細(xì)胞，Nestin陽(yáng)性率大于9

2、5％，表示傳至第三代的細(xì)胞仍為神經(jīng)干細(xì)胞。
　　2、將原代培養(yǎng)至第三代的神經(jīng)干細(xì)胞隨機(jī)分為4組:空白組，終濃度為0.1％的DMSO組，丙泊酚終濃度為20與50uM組，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12h。
　　3、取分組的神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)藥物處理培養(yǎng)2小時(shí)后，加入終濃度為10μ M的Edu，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)后進(jìn)行Edu免疫熒光染色，用Edu的陽(yáng)性率檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力。
　　4、取分組的神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6小時(shí)后，收集神

3、經(jīng)干細(xì)胞按照Tirzal試劑的說(shuō)明書提取各組細(xì)胞的總RNA，再將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，采用熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)法（Real-Time PCR）檢測(cè)各組樣本中Stat3、Sox2和Notch1 mRNA的含量。
　　5、取分組的神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6小時(shí)后，收集各組神經(jīng)干細(xì)胞并提取總蛋白，采用Western blotting法檢測(cè)Stat3及p-Stat3蛋白含量的表達(dá);
　　6、取分組的神經(jīng)干細(xì)胞，經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6

4、小時(shí)后，將神經(jīng)干細(xì)胞接種到Transwell板中，用遷移至小板下室的細(xì)胞數(shù)量表示神經(jīng)干細(xì)胞的遷移能力。
　　結(jié)果：
　　1、與空白組相比，Edu免疫熒光染色檢測(cè)結(jié)果表明，丙泊酚組促進(jìn)了神經(jīng)干細(xì)胞增殖能力(P＜0.05);
　　2、與空白組相比，qPCR檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，丙泊酚組Stat3與Sox2 mRNA的含量上升顯著(P＜0.05);
　　3、與空白組相比，Western blotting檢測(cè)結(jié)果表明，丙泊酚組p