當(dāng)歸芍藥散活性部位JD-30對(duì)Alzheimer病模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的影響及機(jī)制研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一種嚴(yán)重危害人類健康的神經(jīng)退行性疾病。由于其病因和發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,迄今尚不十分清楚,因此尚無(wú)理想的防治藥物。
　　當(dāng)歸芍藥散(Danggui-Shaoyao-San,DSS)是在近年報(bào)道較多的在臨床和藥理學(xué)研究中對(duì)AD均顯示出良好療效的傳統(tǒng)中藥方劑。該方出自東漢張仲景的《金匱要略》,全方由當(dāng)歸、芍藥、川芎、茯苓、白術(shù)和澤瀉6味藥組成。上世紀(jì)80年代,日本研究人員首先在臨床

2、發(fā)現(xiàn)DSS對(duì)AD有明顯的治療作用。此后,大量報(bào)道證實(shí)了DSS對(duì)包括AD在內(nèi)的多種癡呆患者有明顯的治療作用;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,DSS能改善東莨菪堿、腦缺血損傷等多種原因所致的癡呆模型動(dòng)物的認(rèn)知功能障礙;離體組織和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,DSS對(duì)β-淀粉樣蛋白(β-amyloid protein,Aβ)、谷氨酸等誘導(dǎo)的神經(jīng)元損傷具有保護(hù)作用。然而,迄今為止,DSS治療AD和改善動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚未明確,尤其是DSS對(duì)Aβ這一構(gòu)成AD最

3、主要特征性病理改變的核心分子的作用尚無(wú)系統(tǒng)研究的報(bào)道。
　　為此,本研究室在前期已證明DSS具有改善動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力和海馬片突觸可塑性損傷作用的基礎(chǔ)上,與植物化學(xué)研究室合作,對(duì)DSS進(jìn)行了分離提取。本研究首先采用離體海馬片觀察了DSS各提取部位對(duì)大鼠海馬片CA1區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞和長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)(Long-term potentiation,LTP)的影響;進(jìn)而采用Aβ側(cè)腦室注射小鼠和快速老化模型小鼠(senescence acceler

4、ated mouse,SAM)兩種AD模型動(dòng)物,觀察了DSS活性部位JD-30對(duì)模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能障礙和LTP損傷的影響;最后通過(guò)觀察JD-30對(duì)動(dòng)物腦內(nèi)Aβ含量、沉積、Aβ生成代謝相關(guān)基因表達(dá)、神經(jīng)元和突觸損傷的影響,以及JD-30活性成分的作用等探討了JD-30改善學(xué)習(xí)記憶功能障礙及LTP損傷的作用機(jī)理。
　　一、DSS提取部位對(duì)大鼠海馬片CA1區(qū)LTP的影響。
　　通過(guò)化學(xué)提取,獲得了DSS的數(shù)個(gè)提取部位,根據(jù)各部位

5、的成分及極性分析,選用了DSS-W、DSS-A-E、DSS-A-N-30和DSS-JD-30四個(gè)提取部位進(jìn)行活性篩選和評(píng)價(jià)。LTP作為突觸可塑性(synaptic plasticity)的重要表現(xiàn)形式之一,被認(rèn)為是學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ),并被廣泛應(yīng)用于學(xué)習(xí)記憶的生理學(xué)和藥理學(xué)研究。本部分研究采用離體大鼠海馬片,觀察了DSS上述提取部位對(duì)海馬CA1區(qū)基礎(chǔ)突觸傳遞和LTP的影響,旨在評(píng)價(jià)各提取部位對(duì)海馬神經(jīng)突觸可塑性的藥理學(xué)作用。

6、　　研究結(jié)果,結(jié)合本課題組前期研究已證實(shí)的DSS含藥血清對(duì)Aβ25-35所致海馬LTP損傷具有保護(hù)作用的結(jié)果,初步推測(cè),JD-30是DSS中發(fā)揮改善LTP損傷作用的活性部位之一,芍藥苷則可能是JD-30中發(fā)揮此作用的活性成分之一。
　　二、JD-30對(duì)AD模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的影響。
　　在上述研究的基礎(chǔ)上,本研究進(jìn)一步在整體動(dòng)物上選用了Aβ側(cè)腦室注射小鼠和快速老化模型小鼠兩種AD動(dòng)物模型對(duì)JD-30進(jìn)行研究,觀察其對(duì)動(dòng)物學(xué)

7、習(xí)記憶功能障礙的影響。
　　JD-30對(duì)Aβ側(cè)腦室注射和SAMP8兩種AD模型動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙具有明顯改善作用,對(duì)SAMP8海馬片LTP損傷有明顯的改善作用。進(jìn)一步證實(shí),JD-30可能是DSS中發(fā)揮益智作用的活性部位之一。
　　三、JD-30改善AD模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制研究。
　　為進(jìn)一步研究JD-30改善AD模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的機(jī)制,針對(duì)AD發(fā)生發(fā)展的主要病理變化及關(guān)鍵分子,本部分研究對(duì)前述行為學(xué)實(shí)

8、驗(yàn)結(jié)束后的動(dòng)物取腦組織標(biāo)本,觀察了JD-30對(duì)動(dòng)物腦內(nèi)Aβ含量和淀粉樣蛋白沉積的影響、對(duì)腦內(nèi)Aβ生成代謝相關(guān)差異基因表達(dá)的影響以及對(duì)腦內(nèi)神經(jīng)元和突觸損傷的影響,并在體外對(duì)JD-30及其主要成分保護(hù)細(xì)胞損傷的機(jī)制進(jìn)行了初步探討。
　　通過(guò)以上研究，本論文主要得出以下結(jié)論:
　　1.JD-30對(duì)Ap25-35所致大鼠海馬片CA1區(qū)LTP抑制有明顯改善作用，其可能是Dss中改善LTP損傷的活性部位之一。
　　2.JD-30對(duì)

9、Ap25-35側(cè)腦室注射小鼠和SAMP8兩種AD模型動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)記憶功能障礙有明顯的改善作用，對(duì)SAMP8海馬片CA1區(qū)的LTP損傷有明顯改善作用。
　　3.調(diào)節(jié)APP基因和IDE基因的異常表達(dá)，降低動(dòng)物腦內(nèi)的Ap含量，減少其沉積，抑制Ap的聚集和纖維化，減輕Ap25-35引起的細(xì)胞活力降低和早期凋亡率升高，阻止神經(jīng)元和突觸的損傷，可能是JD-30發(fā)揮改善動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能障礙和LTP損傷的作用途徑之一。
　　4.芍藥普可能