RGD-蛛絲蛋白工程菌高密度發(fā)酵條件的優(yōu)化及支架材料的細(xì)胞相容性研究.pdf

1、蜘蛛絲在生物材料和組織工程領(lǐng)域激起了很大的研究興趣，本室已利用基因工程方法構(gòu)建了含有特定細(xì)胞黏附信號(hào)識(shí)別功能的RGD-三肽的重組蛛絲蛋白多聚物pNSR-16/BL21(DE3)plysS，在工程菌搖瓶培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)工藝的基礎(chǔ)上，采取Do-stat分批補(bǔ)料培養(yǎng)，選擇高密度發(fā)酵過(guò)程中pH、溫度、誘導(dǎo)劑和前體物甘氨酸/丙氨酸濃度四個(gè)因素，通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)發(fā)酵工藝多因素條件進(jìn)行優(yōu)化，確立了蛛絲蛋白基因工程菌10L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵的最佳工藝條件

2、。 以基因重組蛛絲蛋白為基礎(chǔ)原料，與聚乙烯醇多聚物共混，制備組織工程多孔薄膜支架材料。從原核細(xì)胞分離純化重組蛋白，細(xì)胞裂解的同時(shí)細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)的內(nèi)毒素也隨之釋放出來(lái)，對(duì)蛛絲蛋白支架材料在組織工程學(xué)方面的應(yīng)用有所影響，本文采用物理和化學(xué)方法去除內(nèi)毒素，達(dá)到了醫(yī)學(xué)材料的要求。 考察了支架材料與細(xì)胞的生物相容性，采取NIH3T3細(xì)胞與作為細(xì)胞外基質(zhì)的支架材料體外聯(lián)合培養(yǎng)評(píng)價(jià)體系。對(duì)蛛絲蛋白pNSR-16和天然高分子pNSR-Z支