雪旺細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及與支架材料的生物相容性研究.pdf

1、周圍神經(jīng)缺損比較常見，臨床上應(yīng)用最廣的解決方式是自體神經(jīng)移植。自體神經(jīng)移植是臨床上治療周圍神經(jīng)缺損的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但自體神經(jīng)移植存在著很大的缺陷，如供區(qū)感覺障礙、自體神經(jīng)來源有限及遺留手術(shù)疤痕等問題，對(duì)于較長(zhǎng)的或粗大的神經(jīng)缺損，自體神經(jīng)移植難以滿足需要。隨著周圍神經(jīng)組織工程的興起，自體神經(jīng)來源不足的問題可望解決。 目的： 1.采用SD大鼠的雪旺細(xì)胞(SC)作為周圍神經(jīng)組織工程的種子細(xì)胞，在體外分離培養(yǎng)，探索體外培養(yǎng)及增殖雪

2、旺細(xì)胞的方法。 2.選取生長(zhǎng)狀況和純度較好的第三代細(xì)胞，將經(jīng)組織酶消化下來的細(xì)胞移植到單純殼聚糖和復(fù)合FK506殼聚糖兩種支架材料上，與第四代單純細(xì)胞培養(yǎng)作為對(duì)照，觀察雪旺細(xì)胞與支架材料的生物相容性。 方法： 1.取SD大鼠雙側(cè)的坐骨神經(jīng)，預(yù)變性后，剪碎至1mm<'3>大小的組織塊，單酶消化法進(jìn)行分離培養(yǎng)，Geneticin液抑制成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，低濃度酶快速消化傳代進(jìn)一步純化雪旺細(xì)胞，用光鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、S-1

3、00蛋白進(jìn)行鑒定。 2.取生長(zhǎng)狀況較好的第三代細(xì)胞，經(jīng)組織酶消化下來的細(xì)胞移植到上述兩種支架材料上，對(duì)照組繼續(xù)傳代培養(yǎng)以作對(duì)照，用MTT法(四甲基偶唑鹽微量酶反應(yīng)比色法)比較不同支架上細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和S-100蛋白免疫鑒定細(xì)胞純度。 結(jié)果： 1、通過上述方法分離培養(yǎng)獲得了經(jīng)S-100蛋白鑒定純度為85﹪的第三代雪旺細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)量為2.764×10<'7>/ml，細(xì)胞形態(tài)多數(shù)為梭形。 2、

4、雪旺細(xì)胞在復(fù)合FK506殼聚糖組純度為93﹪，單純殼聚糖組純度為89﹪，第四代單純培養(yǎng)組純度為76﹪。 3、單純第四代雪旺細(xì)胞形態(tài)大部分呈梭形，少部分為三角形，細(xì)胞活力一般，細(xì)胞OT值為0．1293，細(xì)胞排列不規(guī)則；單純殼聚糖培養(yǎng)組梭形細(xì)胞比例更大，形態(tài)更規(guī)則，細(xì)胞活力較好，細(xì)胞OT值為0.1568，細(xì)胞排列呈現(xiàn)柵欄狀；復(fù)合FK506殼聚糖組細(xì)胞形態(tài)最規(guī)則，細(xì)胞活力最好，細(xì)胞OT值為0.1805，細(xì)胞排列成典型的漩渦狀或柵欄狀。