Nrf2和HO-1在腎癌組織中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的:腎癌是泌尿系腫瘤中常見的腫瘤，70％-80％為透明細(xì)胞癌，近年發(fā)病有增加趨勢。尋找腎癌的新靶點(diǎn)對于腎癌的早期發(fā)現(xiàn)及預(yù)后并制定治療方案有著非常重要的意義。在腫瘤形成和細(xì)胞增殖過程中，氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)與之密切相關(guān)，已成為國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)，與氧化應(yīng)激相關(guān)途徑的有關(guān)基因有可能成為潛在的藥物治療腫瘤的作用靶點(diǎn)。目前研究發(fā)現(xiàn)很多藥物是通過調(diào)節(jié)Nrf2/HO-1信號通路來發(fā)揮抗氧化及抗炎作用的。為探討Nrf2和HO-1與腎癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)

2、系，本實(shí)驗(yàn)通過免疫組化SABC和RT-PCR法檢測Nrf2和HO-1在腎癌和癌旁正常組織中的表達(dá)情況，探討Nrf2和HO-1在腎癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:選取河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院外科手術(shù)切除的腎癌組織標(biāo)本51例。選其中23例患者中的癌旁組織（經(jīng)病理證實(shí)為正常腎組織）為對照組。所有病例術(shù)前均未進(jìn)行過放療和（或）化療。所有標(biāo)本分為兩份，一份經(jīng)4％甲醛溶液固定，石蠟塊包埋，另一份保存于液氮之中。
　　免疫組織化學(xué)方法檢測:

3、應(yīng)用免疫組化技術(shù)，從蛋白水平檢測石蠟包埋組織中Nrf2和HO-1的表達(dá)，其中腎癌組織標(biāo)本51例，正常腎組織標(biāo)本23例。采用雙評分半定量法來進(jìn)行評分，綜合統(tǒng)計(jì)染色陽性率及染色強(qiáng)度，運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，比較腎癌組織和正常腎組織中Nrf2及HO-1的陽性表達(dá)率之間的差異。采用x2檢驗(yàn)，把具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著性差異的臨界值定為P＜0.05。Nrf2與HO-1關(guān)系采用Pearson相關(guān)分析。
　　RT-PCR方法檢測:根據(jù)T

4、rizol試劑盒說明提取冰凍組織中的總RNA，加入RT反應(yīng)體系管，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA，設(shè)立β-actin基因片段為Nrf2和HO-1基因表達(dá)的內(nèi)參照，在RT-PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增，取每個標(biāo)本的擴(kuò)增產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，以DNA Marker(DL2000)作為標(biāo)準(zhǔn)片段標(biāo)記，電泳后用紫外透射儀觀察，應(yīng)用Quantity One凝膠圖象分析軟件對目的電泳條帶進(jìn)行分析，以β-actin電泳條帶作為參照，結(jié)果以兩者吸光度的比值表示。兩組間

5、吸光度比值采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1免疫組織化學(xué)染色示:Nrf2主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞漿中，在腎癌組織中的陽性表達(dá)率為82.4％，在癌旁正常組織中表達(dá)的陽性率為34.8％，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.00，P＜0.05)。HO-1主要位于腫瘤細(xì)胞的胞漿中，其在腎癌組織中的陽性表達(dá)率為76.5％，在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率為39.1％，二者陽性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

6、=0.02，P＜0.05)。Nrf2和HO-1蛋白的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.515 P＜0.05)。
　　2 RT-PCR結(jié)果顯示:Nrf2在腎癌和癌旁正常組織的表達(dá)量分別為0.747±0.101和0.374±0.071，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HO-1在腎癌和癌旁正常組織的表達(dá)量分別為0.853±0.078和0.410±0.085，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1 Nrf2和HO