農(nóng)桿菌介導(dǎo)iaaM基因創(chuàng)造單性結(jié)實(shí)酸漿種質(zhì)資源.pdf_第1頁
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1、本文研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化iaaM基因,使iaaM基因在酸漿果實(shí)中特異表達(dá),提高果實(shí)中生長(zhǎng)素濃度,創(chuàng)造遺傳穩(wěn)定的酸漿單性結(jié)實(shí)品種,為酸漿單性結(jié)實(shí)育種提供了新的種質(zhì)資源.本研究獲得的主要結(jié)果如下: 1、以MS為基本培養(yǎng)基,采用TDZ、6-BA、NAA等多種激素不同配比的組合,同時(shí)對(duì)酸漿的外植體篩選、再生芽的伸長(zhǎng)和生根進(jìn)行了研究。經(jīng)過對(duì)比試驗(yàn),確定了最佳再生體系。篩選出酸漿高效的再生培養(yǎng)基為:MS+TDZ1.0mg/L+NAA0.5

2、mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂8g/L;生根培養(yǎng)基為MS+NAA0.5 mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂8g/L,生根苗移栽存活率達(dá)到90%以上。同時(shí)還研究了不同的外植體類型、外植體種類以及激素濃度對(duì)再生的影響,發(fā)現(xiàn)葉片是最佳的外植體,TDZ對(duì)酸漿的誘導(dǎo)有很大的影響,并且不同基因型對(duì),TDZ濃度的響應(yīng)不同。 2、本試驗(yàn)明確了不同酸漿品種不定芽分化及生根培養(yǎng)分別用以篩選轉(zhuǎn)化植株的卡那霉素濃度,并通過侵染試驗(yàn)對(duì)比轉(zhuǎn)化率,建立農(nóng)桿菌侵染

3、苦職葉片的遺傳轉(zhuǎn)化受體體系:70mg/L的Km是苦職葉片外植體篩選培養(yǎng)的臨界耐受濃度,20mg/L Km是苦職生根篩選培養(yǎng)的臨界濃度;培養(yǎng)基中濃度為350mg/L的頭孢霉素能夠很好的抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng),且對(duì)葉片外植體的再生率和不定芽影響最小,可作為苦職的抑菌性抗生素。 3、在建立苦職遺傳受體體系的基礎(chǔ)上,通過GUS組織染色法研究了影響轉(zhuǎn)化效果的各因子,建立高效苦職的遺傳轉(zhuǎn)化體系:以預(yù)培養(yǎng)24h的苦職葉片為轉(zhuǎn)化材料,用OD600為0

4、.6的攜帶有iaaM基因的農(nóng)桿菌菌液侵染8min,24℃接種在附加100gmol/L乙酰丁香酮、pH為5.4的共培養(yǎng)基上共培養(yǎng)2d,五正遲培養(yǎng)2d,用選擇壓為70mg/L的Km連續(xù)篩選直至不定芽生成,待不定芽長(zhǎng)至1cm左右時(shí)轉(zhuǎn)入附加20mg/LKm的生根培養(yǎng)基中,繼續(xù)篩選,并對(duì)生根抗性植株進(jìn)行了PCR和Southern blotting檢測(cè),其中28.2%的被檢植株產(chǎn)生Southem雜交信號(hào),證明iaaM基因已整合到苦職基因組中,外源基

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