農(nóng)桿菌介導(dǎo)DSACO基因轉(zhuǎn)化‘明水’梨的研究.pdf

1、梨是薔薇科（Rosaceae）梨亞料（Romaceae）梨屬（Pyrus）多年生木本植物，是世界主要的果樹(shù)作物之一，栽培面積和產(chǎn)量均僅次于蘋(píng)果。砂梨（PyruspyrifoliaNakm）原產(chǎn)于我國(guó)中部、南部和西部各省，適于在溫暖多雨地區(qū)栽培，是原產(chǎn)于中國(guó)的四個(gè)梨栽培種之一，具有耐熱、抗旱、抗火疫病等優(yōu)良性狀。但其果實(shí)大多貯藏性差，如何提高果實(shí)耐貯性是解決好砂梨產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵問(wèn)題。目前的研究主要是針對(duì)砂梨果實(shí)的生理特點(diǎn)，通過(guò)改善果實(shí)的貯藏

2、條件和采用一些乙烯抑制劑來(lái)延長(zhǎng)砂梨果實(shí)的貨架期，不能解決根本問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)中以‘明水’（PyruspyrifoliaAkemizu）梨為主要試材，通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)導(dǎo)入DSACO基因，提高該品種的耐儲(chǔ)性，提高其市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　　 1、為了將植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)入模式植物番茄中，本研究初次研究了不同濃度ZT和IAA對(duì)‘江疏14號(hào)’番茄子葉再生的影響，表明該品種在MS+ZT
　　 1.5mg/L+IAA0.7mg/L的

3、培養(yǎng)基中再生率為81.3％。建立了DSACO和DSLOX基因轉(zhuǎn)化番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系，對(duì)獲得的抗性植株進(jìn)行初步檢測(cè)，結(jié)果表明上述2個(gè)基因的轉(zhuǎn)化效率低，用于轉(zhuǎn)化后抗性植株假陽(yáng)性率很高。
　　 2、對(duì)原有的植物表達(dá)載體pYF028-DSACO和pYL028-DSLOX進(jìn)行改造。將原有DSACO和DSLOX基因經(jīng)PCR驗(yàn)證后，提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，提取大腸桿菌質(zhì)粒，PCR驗(yàn)證并進(jìn)行雙酶切，將酶切后的目的片段回收，連接與pY

4、H4215空載體上。重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA105感受態(tài)。結(jié)果表明：pYF028-DSACO改造成功并重新命名為pYH4215-ACOi。
　　 3、ACOi基因轉(zhuǎn)化番茄‘江蘇14號(hào)’，實(shí)驗(yàn)中對(duì)不同篩選壓濃度進(jìn)行了梯度實(shí)驗(yàn)，確定潮霉素濃度。對(duì)抑菌素的種類(lèi)和濃度進(jìn)行選擇，確定抑制超強(qiáng)活性農(nóng)桿菌EHA105的方法，最終調(diào)整了適合ACOi基因轉(zhuǎn)化番茄的遺傳轉(zhuǎn)化體系。獲得12個(gè)抗性株系，通過(guò)GUS染色、PCR和PT-PCR檢測(cè)，得到了3

5、個(gè)轉(zhuǎn)基因植株。結(jié)果表明：ACOi用于番茄的轉(zhuǎn)化效率要高于DSACO。
　　 4、以‘明水’梨枝條為外植體，研究了無(wú)菌苗的獲得，無(wú)菌苗的繼代培養(yǎng)和增殖培養(yǎng)。以無(wú)菌苗的葉片為外植體，研究不同基本培養(yǎng)基，不同細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素組合等再生影響因素對(duì)葉片不定芽再生的影響。實(shí)驗(yàn)表明：以在NN69+TDZ1.5mg/L+IBA0.2mg/L+AgNO31.0mg/L，暗培養(yǎng)25d，葉片不定芽再生率最高為71.8％。
　　 5、研究了不