茄子單性結實差異表達序列鑒定及SmMsrA基因功能初步分析.pdf

1、茄子是喜溫蔬菜，在保護地反季節(jié)栽培和春露地早熟栽培中，常因為低溫弱光環(huán)境影響而導致授粉受精困難、落花落果增多、產量和效益降低。單性結實茄子在一定程度上能夠克服不良環(huán)境條件引起的落花落果，提高坐果率、降低栽培成本和改善品質。茄子單性結實對培育早熟、耐低溫和高品質的茄子新品種具有重要意義。本研究以茄子單性結實品系D-10和非單性結實品系03-2為試驗材料，利用熒光定量PCR技術，鑒定篩選已構建的茄子單性結實SSH-cDNA文庫中的差異表達序

2、列。根據(jù)克隆獲得的茄子甲硫氨酸亞砜還原酶A基因（SmMsrA）的cDNA序列，構建SmMsrA基因的VIGS表達載體和RNAi表達載體，對其功能進行初步分析。主要研究結果如下:
　　1.利用實時熒光定量PCR技術，對構建的茄子單性結實SSH-cDNA文庫中的96條UniqueESTs進行相對表達量分析。結果表明，花后4d和6d兩個時期單性結實品系D-10相對表達量上調的序列數(shù)較多。EST序列較高的相對表達量可能對單性結實果實坐果和

3、生長發(fā)育具有重要作用。在茄子果實（子房）發(fā)育過程中相對表達量有顯著差異的EST序列有31條，總體上調表達的EST序列有17條;總體下調表達的EST序列有14條。其中5條序列與抵御低溫相關，7條序列與植物激素代謝相關，有多條序列與植物代謝過程中的蛋白質和碳水化合物的合成相關。抵御低溫脅迫和植物激素代謝相關的序列可能通過與合成蛋白質和碳水化合物相關的序列相互作用，共同調節(jié)單性結實果實的發(fā)育。
　　2.利用RT-PCR從茄子單性結實品系

4、D-10中獲得甲硫氨酸亞砜還原酶A(SmMsrA)基因的編碼區(qū)。通過Gateway同源重組技術，構建了3個含SmMsrA基因不同片段的煙草脆裂病毒（Tobacco rattle virus，TRV）介導的基因沉默(VIGS)表達載體pTRV2-SmMsrAi。表達載體轉入農桿菌GV3101后，用注射壓迫法侵染茄子葉片。采用表型觀察、TRV病毒分子檢測和qRT-PCR技術，評價構建的VIGS體系對SmMsrA基因的沉默效果。結果表明，報告

5、基因PDS沉默后葉片呈現(xiàn)明顯的光漂白現(xiàn)象，mMsrA基因沉默后葉片呈花葉狀、果實變小;葉片和果實中的SmMsrA基因的表達量明顯降低;表明，mMsrA基因是正向調控茄子果實發(fā)育的1個相關基因。
　　3.利用Gateway同源重組技術，成功構建了3個含SmMsrA基因不同片段的RNAi表達載體pHellsgate12-Mi。經菌液PCR和測序驗證SmMsrA基因的RNAi表達載體構建正確，并轉化到農桿菌C58中。為進一步通過轉基因技