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文檔簡介
1、甜櫻桃(Prunus avium L.)種植業(yè)是經(jīng)濟效益最好的果樹產(chǎn)業(yè)之一,有“黃金種植業(yè)”之稱。它是合格的無公害食品,其果實成熟期早,色澤紅艷、晶瑩美觀,果肉香甜。其營養(yǎng)價值、附加值和藥用價值高,深受人們喜愛。但甜櫻桃的自交不親和性和品種名稱的混雜,限制了甜櫻桃的正確評價和合理利用。研究選用5對薔薇科李屬通用引物組合對24個甜櫻桃品種進行了S等位基因的PCR擴增,擴增出的條帶在進行基因克隆測序,序列在GenBank上進行的同源性比較,
2、進而確定S基因型,并且利用SSR標記技術(shù)探討品種間的遺傳多樣性及親緣關(guān)系,旨在為生產(chǎn)果園授粉樹的合理配置,對評價、利用品種資源及進行遺傳育種研究提供理論依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
1.對退火溫度、10×PCR Buffer濃度、dNTP濃度、酶濃度和DNA濃度進行梯度試驗,篩選出適用于本實驗室的S-PCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序,擴增程序和反應(yīng)程序如下:
PCR反應(yīng)體系:每20ul的擴增反應(yīng)混合液包括10×PCR Buffe
3、r2.5μL,dNTPs(2.5 mmol.L-1)1.6μL,引物1(10 umol.L-1)、引物2(10 umol.L-1)均為0.8μL,DNA(50 ng-100 ng)0.5μL,TaqDNA聚合酶(5 U.L-1)0.2μL。PCR反應(yīng)程序:預(yù)變性94℃3 min,94℃30 s,32個循環(huán)(56℃30 s,72℃2 min),72℃延伸5 min,12℃;
2.三對引物組合對甜櫻桃品種的擴增差異很大,比較而言引
4、物組合PruC2+PruC4R擴增效果最好,都能擴增出兩條清晰的S基因條帶,而引物組合EM-PC2consFD+EM-PC3consRD擴增效果較差,僅一部分品種能擴增出來,引物組合BFP93+BFP94擴增效果最差,基本不能擴增出條條帶。S1、S5基因特異擴增引物組合BFP208+BFP209和BFP212+BFP213對材料進行擴增。試材‘布魯克斯’、‘拉賓斯’、‘紅手球’、‘紅寶石’、‘早紅寶石’擴增出一條S1基因;‘勝利’擴增出
5、一條S5基因條帶。
3.采用引物組合PruC2+PruC4R進行S-PCR擴增,擴增片段回收克隆、測序,S基因序列并在GenBank上搜索。結(jié)果表明:在電泳中顯示的相同位置的PCR片段基本是同一種S基因。各S基因擴增片段大小分別是:S1為800 bp,S3為762 bp,S4為962 bp,S5為300 bp,S6為456 bp,S9為650 bp;
4.通過綜合5對引物組合的擴增結(jié)果,確定了24個甜櫻桃S基因型,各
6、S基因型結(jié)果如下:紅手球、早紅寶石基因型為S1S3,拉賓斯基因型為S1S4',紅寶石基因型為S1S6,布魯克斯S基因型為S1S9,那翁S基因型為S3S4,秦林、泰安大紫、先鋒、早大果、麗珠、美早、5-106、左滕錦、桑提娜S基因型為S3S6,黑珍珠、紅燈、薩米脫、秦櫻S基因型為S3S9,勝利S基因型為S5S9,明珠、紅蜜、雷尼、濱庫S基因型為S6S9;
5.在20對SSR引物中,UDP97-403引物等12對引物多態(tài)性較高。聚
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