高良姜等5味山姜屬中藥不同極性部位的化學成分與其溫胃散寒作用研究.pdf

1、目的:
　　1.紅豆蔻、草豆蔻、益智3味山姜屬中藥的最佳提取工藝條件，為3味山姜屬中藥的化學成分分析及其藥理作用研究奠定基礎(chǔ)。
　　2.研究高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智5味山姜屬中藥乙醇提取部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位的高效液相色譜指紋圖譜，分析比較其特征峰所代表的化學成分相關(guān)性。
　　3.采用高效液相色譜法對高良姜和草豆蔻石油醚部位中的高良姜素、山姜素、喬松素、小豆蔻明和榿木酮進行含量測定。
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2、.通過觀察高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻、益智5山姜屬中藥乙醇提取物對胃潰瘍寒證大鼠胃潰瘍指數(shù)、血清環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)含量及cAMP/cGMP比值的影響，比較其溫胃散寒藥效差異。
　　方法:
　　1.分別采用加熱回流提取法、超聲波提取法和冷浸提取法進行提取，確定最佳提取方法，分別采用單因素考察方法確定提取溶劑、乙醇濃度、提取時間和提取次數(shù)的因素水平，運用L9(34)正交試驗方法優(yōu)選紅豆蔻、草豆蔻

3、、益智的提取工藝，采用藥材提取溶劑、溶劑倍量、提取時間、提取次數(shù)為因素的正交設(shè)計，以干膏率作為篩選指標，對其提取工藝進行優(yōu)化。
　　2.采用高效液相色譜法(HPLC)研究5味山姜屬中藥不同極性部位的指紋圖譜，色譜條件:采用phenomenex-C18(250×6mm，5μm)色譜柱，流動相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，檢測波長220nm;采用國家藥典委員會相似度評價軟件分析比較其化學成分相關(guān)性。

4、
　　3.采用高效液相色譜法（HPLC）對高良姜、草豆蔻石油醚部位的高良姜素、山姜素、喬松素、小豆蔻明、榿木酮進行含量測定。色譜條件:采用phenomenex-C18(250×4.6mm，5μm)色譜柱，流動相為乙腈-水溶液，梯度洗脫，流速:1.0mL/min，柱溫:30℃，檢測波長260nm。
　　4.取SPF級SD大鼠90只，隨機取其中10只作為空白組，剩下的大鼠采用寒涼藥冰知母水提液和冰食醋刺激復制胃潰瘍寒證動物模型。

5、造模成功后將大鼠隨機分為模型組、西咪替丁組、附子理中丸組、高良姜組、大高良姜組、紅豆蔻組、草豆蔻組、益智組共8組?？瞻捉M、模型組灌服蒸餾水，其余各組分別灌服各受試藥物。采用酶聯(lián)免疫法測定血清cAMP、cGMP含量，計算cAMP/cGMP比值，觀察5山姜屬中藥對胃實寒證大鼠血清cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值的影響。
　　結(jié)果:
　　1.最佳提取工藝為:乙醇加熱回流提取，采用60％乙醇，溶劑倍量為30倍，提取時間

6、為4h，提取次數(shù)2次。
　　2.5味山姜屬中藥乙醇提取部位化學成分相似度分別為0.935、0.944、0.723、0.882、0.047;石油醚部位化學成分相似度分別為0.741、0.855、0.61、0.51、0.68;乙酸乙酯部位化學成分相似度分別為0.955、0.805、0.371、0.794、0.345。結(jié)果表明，5味山姜屬中藥不同極性部位的指紋圖譜特征峰所代表的化學成分有一定的相似性。
　　3.高良姜素濃度線性范圍

7、為y=31577x-58.17，r=0.9999;山姜素y=153051x+54.07，r=0.9991;榿木酮y=74113x+9.53，r=1;喬松素y=29043x+25.89，r=0.9994;小豆蔻明y=69672x+0.87，r=0.9995，結(jié)果表明高良姜素、山姜素、榿木酮、喬松素、小豆蔻明在線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;樣品平均回收率分別為山姜素97.91％，RSD為1.35％;喬松素97.83％，RSD為1.35％;高良姜素

8、98.62％，RSD為1.93％;小豆蔻明101.17％，RSD為0.86％;榿木酮99.43％，RSD為0.34％，結(jié)果表明方法的準確性良好。
　　4，模型組大鼠胃潰瘍指數(shù)與空白組比較顯著升高(P＜0.01)，給予治療藥后，各治療藥組大鼠胃潰瘍指數(shù)與模型組相比顯著降低(P＜0.01或P＜0.05），高良姜組、紅豆蔻和益智組與模型組相比顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。模型組大鼠血清的cAMP含量比空白組顯著降低(P＜0

9、.01);模型組cAMP值、cAMP/cGMP比值與空白組比明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），cGMP值改變不明顯;給予治療藥后，各治療藥組大鼠血清的cAMP含量與模型組相比顯著升高(P＜0.01或P＜0.05)，cAMP/cGMP比值升高，cGMP值改變不明顯。
　　結(jié)論:
　　1.本提取方法簡單、提取率高，為3味山姜屬中藥的化學成分分析及其藥理作用奠定基礎(chǔ)。
　　2.中藥HPLC指紋圖譜能夠全面反映中藥化

10、學成分整體群集特征，本試驗對5味山姜屬中藥不同極性提取物的指紋圖譜進行探索性研究，各色譜峰在客觀上有一定的相似性，為探討山姜屬中藥親緣關(guān)系與化學成分相關(guān)性提供思路。
　　3.高良姜和草豆蔻石油醚部位的高良姜素、喬松素、榿木酮化學成分分布不同，含量有較大的差異。該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于該屬中藥主要化學成分的含量測定。
　　4.本實驗結(jié)果表明高良姜、大高良姜、紅豆蔻、草豆蔻和益智5味山姜屬中藥對胃黏膜有一定的保護作用。