二甲酸鉀對(duì)斷奶仔豬胃功能及相關(guān)功能基因表達(dá)的影響.pdf

1、本研究旨在探討二甲酸鉀(Potassium diformate，KDF)對(duì)斷奶仔豬胃酸分泌及胃功能的影響及其作用機(jī)制。本試驗(yàn)選取28日齡斷奶、體重為5～7kg仔豬（長(zhǎng)×大）270頭，按照公母比例一致的原則隨機(jī)分為3組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)15頭仔豬。以不添加任何抗生素和酸化劑的基礎(chǔ)日糧為陰性對(duì)照，以基礎(chǔ)日糧添加復(fù)合抗生素(硫酸粘桿菌素16.6mg/kg，吉他霉素45mg/kg，喹乙醇83mg/kg)的為陽(yáng)性對(duì)照，以基礎(chǔ)日糧添加1％ K

2、DF為試驗(yàn)組。分別通過(guò)短期（2周）和長(zhǎng)期（5周）飼養(yǎng)試驗(yàn)研究KDF和抗生素對(duì)斷奶仔豬胃功能及相關(guān)功能基因表達(dá)的影響。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)胃底粘膜的原代細(xì)胞培養(yǎng)，研究KDF對(duì)胃功能基因表達(dá)的影響。
　　1.KDF短期處理對(duì)斷奶仔豬胃功能及功能基因表達(dá)的影響
　　1.1 胃酸及胃蛋白酶活性
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，斷奶仔豬持續(xù)2周采食含1％ KDF的日糧對(duì)仔豬的胃重及胃相對(duì)重量沒(méi)有顯著影響，對(duì)胃食糜中鹽酸(HCl)濃度、

3、乳酸濃度、總酸含量、pH值和胃粘膜中的胃蛋白酶活性沒(méi)有顯著影響;KDF組與抗生素組相比，兩組的胃重、胃相對(duì)重量、胃食糜中HCl濃度、乳酸濃度、總酸含量、食糜pH值、胃粘膜中的胃蛋白酶活性無(wú)顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，兩組仔豬胃重、胃相對(duì)重量、胃食糜pH值、HCl、總酸含量，以及胃粘膜中的胃蛋白酶活性無(wú)顯著差異，但抗生素組食糜中乳酸的含量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.045)。
　　1.2 功能基因表達(dá)
　　KDF組與基

4、礎(chǔ)日糧組相比，KDF組胃底粘膜組織中生長(zhǎng)抑素(Somatostatin，SS)mRNA、生長(zhǎng)素(ghrelin) mRNA、膽囊收縮素(Cholecystokinin，CCK) mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于基礎(chǔ)日糧組(P=0.005，P＜0.001，P＜0.001);H+-K+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.002)。胃底粘膜組織中胃泌素(gsatrin) mRNA相對(duì)表達(dá)量?jī)山M之間無(wú)顯著差異;KDF組與抗生

5、素組相比，KDF組胃底粘膜中SS和ghrelin mRNA表達(dá)顯著低于抗生素組(P=0.013，P=0.045)，兩組胃底粘膜gastrin，CCK和H+-K+-ATPase mRNA的表達(dá)無(wú)顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜組織中g(shù)astrin、ghrelin和CCK mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于基礎(chǔ)日糧組（P=0.006，P=0.019，P＜0.001)，H+-K+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0

6、.006)，但兩組胃底粘膜中的SS mRNA無(wú)顯著差異。仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS含量無(wú)顯著的組間差異。
　　2.KDF長(zhǎng)期處理對(duì)斷奶仔豬胃功能及功能基因表達(dá)的影響
　　2.1 胃酸及胃蛋白酶活性
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，斷奶仔豬持續(xù)5周采食含10gkgKDF的日糧，對(duì)仔豬的胃重和胃食糜中總酸濃度無(wú)顯著影響，但顯著降低胃相對(duì)重量、胃食糜中HCl濃度和胃粘膜中的胃蛋白酶活性(P=

7、0.050，P=0.016，P=0.001)，顯著升高胃食糜pH值和乳酸含量(P=0.018，P=0.001);KDF組與抗生素組相比，KDF組斷奶仔豬的胃重和胃食糜中乳酸含量顯著高于抗生素組(P＜0.001，P=0.006)，KDF組胃相對(duì)重量、胃食糜中HCl濃度、總酸含量，以及胃食糜pH值、胃粘膜中的胃蛋白酶活性與抗生素組之間無(wú)顯著差異;抗生素組與基礎(chǔ)日糧組相比，抗生素組仔豬胃重、胃相對(duì)重、胃蛋白酶活性、胃液HCl濃度都顯著低于基礎(chǔ)

8、日糧組(P=0.004，P=0.016，P＜0.001，P=0.012)，而胃食糜pH值、乳酸、總酸濃度與基礎(chǔ)日糧組相比沒(méi)有顯著差異。
　　2.2 基因表達(dá)
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜gsatrin、H+-K+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著升高(P＜0.001，P=0.005)，SS和CCK mRNA顯著下降(P=0.009，P=0.001)，ghrelin mRNA無(wú)顯著變化;KDF組與抗生素組相比，K

9、DF組胃底粘膜SS、CCK和ghrelin mRNA的表達(dá)顯著低于抗生素組(P=0.003，P=0.002，P=0.002)，但gastrin和H+-K+-ATPase mRNA表達(dá)兩組之間無(wú)顯著差異;抗生素組和基礎(chǔ)日糧組相比，胃底粘膜組織中g(shù)hrelin、gastrin和H+-K+-ATPase mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于基礎(chǔ)日糧組(P=0.002，P＜0.001，P=0.005)，SS和CCK mRNA相對(duì)表達(dá)量和基礎(chǔ)日糧組相比沒(méi)有

10、顯著差異。
　　2.3 胃底粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS的含量
　　KDF組與基礎(chǔ)日糧組相比，仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin蛋白濃度沒(méi)有顯著差異;但KDF顯著提高了胃粘膜中SS的濃度(P=0.009)。KDF組與抗生素組相比，仔豬胃粘膜中H+-K+-ATPase活性、gastrin和SS含量沒(méi)有顯著差異?？股亟M與基礎(chǔ)日糧組相比，仔豬胃粘膜中g(shù)astrin和SS含量都沒(méi)有

11、顯著差異，但是抗生素顯著降低了胃粘膜中H+-K+-ATPase活性（P=0.049）。
　　3.體外試驗(yàn)分析KDF對(duì)仔豬胃功能基因表達(dá)的影響
　　仔豬胃粘膜上皮細(xì)胞經(jīng)含0、0.1、1.0和10 mg/ml KDF無(wú)血清培養(yǎng)4小時(shí)后收集細(xì)胞提取RNA，用相對(duì)定量RT-PCR法分析細(xì)胞中SS、gastrin、ghrelin、H+-K+-ATPase和GPR43 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)通過(guò)5頭豬的重復(fù)試驗(yàn)表明，1 mg/ml

12、KDF顯著提高胃粘膜上皮細(xì)胞gastrin(P=0.042)和GPR43 mRNA相對(duì)表達(dá)(P=0.049)，10 mg/ml KDF顯著提高了SS mRNA水平(P=0.009)和H+-K+-ATPase mRNA(P=0.028)相對(duì)表達(dá)量，而0.1～10 mg/ml KDF對(duì)胃粘膜上皮細(xì)胞的ghrelin mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響。
　　總結(jié):(1)斷奶仔豬日糧中添加KDF和混合抗生素添加劑均影響仔豬胃的發(fā)育和功能基因表