肝素對(duì)小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1淋巴道轉(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)旨在探討肝素在P388D1細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用，同時(shí)也進(jìn)一步研究L-選擇蛋白介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制，為肝素抑制腫瘤轉(zhuǎn)移提供較有利的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的：本實(shí)驗(yàn)選取淋巴瘤細(xì)胞P388D1為研究對(duì)象，以DBA小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用黏附實(shí)驗(yàn)、歸巢實(shí)驗(yàn)和整體實(shí)驗(yàn)來(lái)探討肝素對(duì)P388D1細(xì)胞小鼠淋巴道轉(zhuǎn)移的抑制作用，為肝素用于治療腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。 方法：利用MTT實(shí)驗(yàn)方法，流式細(xì)胞技術(shù)、RT-PCR技術(shù)、免

2、疫組化、動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等一系列實(shí)驗(yàn)方法，輔之以小鼠淋巴結(jié)冰凍切片黏附實(shí)驗(yàn)，歸巢實(shí)驗(yàn)及整體實(shí)驗(yàn)，來(lái)驗(yàn)證肝素的細(xì)胞毒性，探討肝素阻止CFSE標(biāo)記的P388D1細(xì)胞在小鼠淋巴結(jié)的滯留以及肝素抑制P388D1細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小鼠各淋巴結(jié)的情況。 結(jié)果：1.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，100u的肝素對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性作用； 2.體外黏附實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示肝素能夠競(jìng)爭(zhēng)抑制P388D1細(xì)胞表達(dá)的L-選擇蛋白同DBA小鼠淋巴結(jié)上配體的結(jié)合，從而降低P388D1

3、細(xì)胞同淋巴結(jié)的黏附，其黏附結(jié)果為：對(duì)照組平均細(xì)胞粘附數(shù)為個(gè)5.34±0.96個(gè)/μm2；實(shí)驗(yàn)組平均細(xì)胞粘附數(shù)為個(gè)0.69±0.21個(gè)/μm2。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間存在顯著性差異(P＜.001)。 3.歸巢實(shí)驗(yàn)的結(jié)果：CFSE標(biāo)記的P388D1細(xì)胞足墊注射1h后的流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而12h流式細(xì)胞儀的檢測(cè)結(jié)果表明，停留在小鼠腘窩的標(biāo)記細(xì)胞數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，由此可以推斷肝素能夠阻止CFSE標(biāo)記的P388

4、D1細(xì)胞在小鼠淋巴結(jié)的滯留。 4.整體實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組小鼠各部位的淋巴結(jié)石蠟切片顯示，對(duì)照組小鼠的各部位淋巴結(jié)均有腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，轉(zhuǎn)移率為100﹪，而用肝素的實(shí)驗(yàn)組有很大不同，小鼠各部位的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為：腘窩100﹪、腹股溝70﹪、腋下淋巴結(jié)30﹪。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，肝素的確能夠抑制P388D1細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移。 5.RT-PCR及免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示P388D1細(xì)胞表達(dá)CD147，而正常淋巴結(jié)細(xì)胞不表達(dá)CD1