破壁靈芝孢子粉對(duì)小鼠T細(xì)胞淋巴瘤的抑制作用.pdf

1、目的：
　　 以小鼠T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株EL-4為模型，研究靈芝孢子粉對(duì)EL-4細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用；建立MNU誘導(dǎo)小鼠胸腺T細(xì)胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型，利用裸鼠移植瘤研究靈芝孢子粉對(duì)胸腺T細(xì)胞淋巴瘤的抑制作用并初步探討其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.第一部分，研究靈芝孢子粉體外對(duì)EL-4細(xì)胞的抑制作用：(1)用MTT法研究破壁靈芝孢子粉5 g/L、2.5 g/L、1.25 g/L、0.625 g/L、0.31

2、25 g/L五個(gè)不同濃度下，對(duì)EL-4細(xì)胞的抑制作用。(2)應(yīng)用透射電鏡技術(shù)檢測(cè)靈芝孢子粉對(duì)EL-4細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用。(3)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)靈芝孢子粉作用后EL-4細(xì)胞Bax、Bcl-2、Bcl-xl基因mRNA表達(dá)水平的改變。
　　 2.第二部分，胸腺T細(xì)胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型的建立
　　 建立MNU誘導(dǎo)胸腺T細(xì)胞淋巴瘤裸鼠移植瘤模型，并將腫瘤在裸鼠體內(nèi)連續(xù)傳代，取第四代裸鼠腋下腫瘤進(jìn)行HE染色及免疫組化染色，

3、鑒定此腫瘤與模型一致，建立穩(wěn)定的裸鼠移植瘤。
　　 3.第三部分，研究靈芝孢子粉對(duì)胸腺T細(xì)胞淋巴瘤裸鼠移植瘤的抑制作用并初步探討其作用機(jī)制。采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)法隨機(jī)分為空白組、陽性組及靈芝孢子粉高、中、低劑量組?？瞻捉M腹腔注射生理鹽水，陽性組腹腔注射環(huán)磷酰胺，靈芝孢子粉組分高、中、低劑量組(分別為高劑量4g/kg、中劑量2.1g/kg、低劑量1.05g/kg)，灌胃給藥。(1)觀察裸鼠的活動(dòng)情況及皮下瘤的生長(zhǎng)，給藥21天后處死，取

4、瘤組織稱重，計(jì)算抑瘤率。按公式V=ab2/2(mm3)計(jì)算腫瘤體積。(2)取高劑量組及生理鹽水組做病理觀察，采用蘇木精一伊紅(HE)染色法觀察腫瘤組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞壞死和細(xì)胞形態(tài)改變。(3)電鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 1.(1)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，靈芝孢子粉對(duì)EL-4細(xì)胞的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用，并且抑制率隨時(shí)間及劑量的增加而升高，具有一定的時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系。濃度為5g/l時(shí)，作用時(shí)間為48h、7h2、96h

5、后，靈芝孢子粉對(duì)EL-4細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率分別是35.5％、48.1％、40.0％。靈芝孢子粉對(duì)EL-4細(xì)胞的IC50值隨作用時(shí)間增加而減小，72h達(dá)到最低，為4.76g/l。(2)透射電鏡結(jié)果顯示，靈芝孢子粉可誘導(dǎo)EL-4細(xì)胞凋亡。(3)RT-PCR顯示，以5g/l靈芝孢子粉處理EL-4細(xì)胞48小時(shí)后，Bax基因的mRNA表達(dá)明顯上調(diào)，Bcl-2、Bcl-xl基因的mRNA表達(dá)稍下調(diào)。
　　 2.裸鼠移植瘤的鑒定 HE染色表現(xiàn)為

6、彌漫的中等大小的淋巴樣細(xì)胞，胞質(zhì)較少，核圓形或橢圓形，染色質(zhì)細(xì)膩，核分裂象多見，少見星空現(xiàn)象。免疫組化顯示瘤細(xì)胞表達(dá)CD3和TDT。與我們前期利用MNU誘導(dǎo)的T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞一致。
　　 3.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)顯示，(1)靈芝孢子粉給藥劑量為4g/kg(高劑量組)、2.1g/kg(中劑量組)和1.05g/kg(低劑量組)時(shí)，對(duì)裸鼠移植瘤的抑制率分別為45.8％、37.5％和25.0％，其中高劑量組、中劑量組與生理鹽水組比較均有顯著差

7、異(P＜0.01)。(2)腫瘤組織切片，HE染色后鏡下觀察，靈芝孢子粉高劑量組與生理鹽水對(duì)照組相比，腫瘤壞死區(qū)域較大，核碎屑、細(xì)胞固縮較多。(3)透射電鏡結(jié)果顯示，靈芝孢子粉可誘導(dǎo)T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞凋亡。
　　 結(jié)論：
　　 (1)靈芝孢子粉在體外可抑制小鼠T細(xì)胞淋巴瘤EL-4細(xì)胞株的增殖并誘導(dǎo)其凋亡，可能機(jī)制是通過上調(diào)Bax mRNA，下調(diào)Bcl-2、Bcl-xl mRNA表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。
　　 (2)靈芝孢子粉對(duì)裸