STIP1蛋白參與P2X7受體介導(dǎo)的小鼠淋巴瘤細(xì)胞淋巴道轉(zhuǎn)移.pdf

1、淋巴瘤起源于淋巴結(jié)和淋巴組織，是惡性腫瘤中的一組異質(zhì)性疾病，是最早發(fā)現(xiàn)的血液系統(tǒng)惡性腫瘤之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(World Health Organization，WHO)在2001年提出，并在2008年重新修訂的分型標(biāo)準(zhǔn)，惡性淋巴瘤可以分為霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkinlymphoma，NHL)兩大類。非霍奇金淋巴瘤在中國比較常見，在所有的淋巴瘤病例中，大約占90％左右。

2、惡性淋巴瘤的診斷效率低下，治療方法少，并且存在嚴(yán)重的副作用，給患者帶來了極大的困擾。P2X7受體(P2X7R)存在于細(xì)胞膜上，是一種ATP調(diào)節(jié)的配體門控離子通道。被ATP激活后，可以允許Na+、K+、Ca2+等陽離子和一些親水性大分子通過。P2X7R既表達(dá)在腫瘤細(xì)胞中，也表達(dá)在非腫瘤細(xì)胞中，并且參與細(xì)胞的增值和凋亡。我們早期的研究曾經(jīng)報道過，抑制淋巴瘤細(xì)胞株P(guān)388D1中P2X7R的表達(dá)可以顯著降低其向外周淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力，說明P2X7

3、R在淋巴瘤淋巴道的轉(zhuǎn)移過程中起到了重要的作用。STIP1是一種合作伴侶蛋白，它含有三個TPR(three tetratricopeptide repeat)結(jié)構(gòu)域，這是STIP1發(fā)揮功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。STIP1可以與分子伴侶Hsp70和Hsp90相互作用并形成復(fù)合物，調(diào)節(jié)分子伴侶的功能，從而參與包括RNA的剪接、蛋白質(zhì)折疊、構(gòu)象改變以及功能性蛋白的合成等一系列生物過程。據(jù)報道，STIP1也廣泛表達(dá)于腫瘤細(xì)胞和非腫瘤細(xì)胞中，能夠?qū)δ[瘤的增值

4、和遷移等起到一定促進的作用。許多研究證實，STIP1蛋白參與了多種腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程。
　　目的:為了進一步闡明P2X7R參與淋巴瘤淋巴道轉(zhuǎn)移的機制，在前期實驗中，本課題組使用沉默了P2X7R的小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1建立淋巴瘤淋巴道轉(zhuǎn)移動物模型，P388D1在小鼠體內(nèi)成瘤，并發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移。然后采用蛋白質(zhì)組學(xué)手段對轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的蛋白質(zhì)表達(dá)情況進行分析，篩選出了STIP1蛋白，發(fā)現(xiàn)當(dāng)P2X7R的表達(dá)被抑制后，STIP1也隨之顯著

5、降低。為了研究STIP1蛋白是否參與了P2X7R介導(dǎo)的淋巴瘤淋巴道轉(zhuǎn)移過程，我們?nèi)藶橐种芐TIP1蛋白在淋巴瘤細(xì)胞株中的表達(dá)，探討STIP1蛋白在淋巴瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中的作用。
　　方法:首先，采用RT-PCR及Western Blot方法檢測小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1和L1210中P2X7R和STIP1表達(dá);其次，使用STIP1干擾慢病毒去感染P388D1和L1210細(xì)胞，檢測感染效率;再次，采用RT-PCR及Western Blo

6、t方法檢測P388D1和L1210細(xì)胞經(jīng)過STIP1干擾慢病毒感染后，STIP1蛋白表達(dá)的抑制情況;最后，將STIP1表達(dá)被抑制的淋巴瘤細(xì)胞P388D1和L1210注射到小鼠足墊部位，建立淋巴道轉(zhuǎn)移模型的，觀察STIP1的抑制對淋巴瘤轉(zhuǎn)移能力以及對小鼠生存時間的影響。
　　結(jié)果:P2X7R和STIP1在小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1和L1210中表達(dá)，STIP1干擾慢病毒可以抑制小鼠淋巴瘤細(xì)胞P388D1和L1210中STIP1的表達(dá)