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文檔簡介
1、本課題的研究主要分為以下三部分: 第一部分 瘦素在Vogt-小柳原田綜合征血清中表達的測定 目的:檢測VKH綜合征活動期、靜止期患者及正常人血清中瘦素的表達,初步確定瘦素是否在VKt{綜合征中可能的作用。 方法: (1)抽取VKH綜合征患者和正常人外周靜脈血2ml,靜置至凝固,常溫分離血清,,-70℃儲存?zhèn)溆茫?(2)采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測血清中瘦素的水平; (3)分別測量
2、VKH綜合征患者及正常人的身高體重,在消除體重指數(shù)后再分析比較VKH患者與正常對照間的瘦素水平。 結論:瘦素在VKH活動期患者血清中的表達顯著高于VKH靜止期和正常人,這就提示其可能在VKH綜合征的發(fā)病中發(fā)揮一定的作用,為我們下一步的研究奠定基礎。 第二部分 瘦素對VKH患者外周血中單個核細胞增殖的作用 目的:體外實驗檢測瘦素對VKH綜合征患者及正常對照外周血單個核細胞(PBMC)增殖的作用。 方法:
3、 (1)采用密度梯度離心法分離VKI-I綜合征患者及正常對照的PBMC; (2)不加入或加入不同濃度的重組人瘦素下對VKH綜合征患者及正常對照的PBMC培養(yǎng)5天,用3H—TdR摻入法檢測在瘦素刺激下人PBMC的增殖率。 結論:瘦素可誘導VKH活動期患者PBMC顯著增殖,且呈劑量依賴性,適當劑量的瘦素誘導活動期患者PBMC的增殖顯著高于VKH靜止期和正常人,這提示瘦素在VKH綜合征發(fā)病中可能通過促淋巴細胞異常增殖的方式
4、發(fā)揮作用。 第三部分 瘦素對VKH患者PBMC細胞因子分泌的作用 目的:體外實驗檢測瘦素對VKH綜合征活動期及靜止期患者PBMC細胞因子分泌的作用。 方法: (1)密度梯度離心法分離VKH綜合征患者的PBMC,與等量的絲裂霉素處理后的正常人PBMC混合培養(yǎng),行混合淋巴細胞反應(MLR),不加入或加入瘦素刺激下培養(yǎng)3天; (2)采用ELISA方法檢測上清中IL-17和IFN-γ的水平; 結論
5、:瘦素可誘導VKH活動期患者PBMC促炎癥因子IFN-γ和IL-17的表達增高,而在靜止期VKH患者中這種促進作用并不明顯,這提示瘦素在VKH綜合征發(fā)病中也可通過促淋巴細胞分泌炎癥細胞因子的方式發(fā)揮作用。 小結: 本文以VKH活動期、靜止期病人和正常對照為研究對象,用ELISA方法檢測血清中瘦素水平;分離外周血單個核細胞,在重組人瘦素刺激下培養(yǎng),用3H-TdR摻入法檢測在瘦素刺激下人PBMC的增殖率,并檢測培養(yǎng)上清中炎癥
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