冠中土壤微生物群落的組成鑒定及定量識別技術(shù)的研制.pdf

1、土壤作為生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分之一，是珍貴的自然資源。而土壤微生物作為土壤中的活性組分，在維持土壤生態(tài)平衡如養(yǎng)分運轉(zhuǎn)、有機質(zhì)分解和環(huán)境污染物凈化中發(fā)揮著重要作用。土壤微生物群落結(jié)構(gòu)組成及活性變化又是衡量土壤質(zhì)量、維持土壤肥力和作物生產(chǎn)力的一個重要指標(biāo)。
　　本課題首先運用PCR為基礎(chǔ)的rRNA文庫的方法，以高次團(tuán)粒土壤微生物宏基因組為模板，成功克隆測序了其原核16S rRNA基因及真核ITS序列，初步解析了冠中土壤微生物群落的組成

2、結(jié)構(gòu)。其次是針對所獲得的16S序列使用基于單堿基差異識別的特異引物設(shè)計技術(shù)，即在設(shè)計過程中人為引入錯配堿基，增加引物特異性，由此設(shè)計出5個門的特異性引物。最后，經(jīng)過篩選和PCR條件優(yōu)化，將設(shè)計的引物用于不同比例混合質(zhì)粒模板和新的土壤微生物宏基因組的實時熒光定量PCR，從而達(dá)到對幾個門的微生物進(jìn)行快速定量識別的目的。
　　基于單堿基差異識別的特異性引物技術(shù)設(shè)計門特異性引物，打破了傳統(tǒng)方法設(shè)計引物的局限，更有助于提高引物對目標(biāo)序列識別