水貂體重、皮長(zhǎng)性狀相關(guān)基因研究及自咬癥病因分子遺傳分析.pdf

1、水貂是小型珍貴毛皮獸，水貂皮、狐皮和波斯羔皮早已成為國(guó)際裘皮貿(mào)易的三大支柱產(chǎn)品。當(dāng)前，水貂產(chǎn)業(yè)正面臨著良好的發(fā)展機(jī)遇和前景，因此，提高水貂的生長(zhǎng)性能，將給水貂養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)更高的經(jīng)濟(jì)效益。本研究以大興安嶺水貂養(yǎng)殖基地飼養(yǎng)的水貂(643只)作為研究對(duì)象，針對(duì)IGF-Ⅰ基因、GH基因、EGF基因、MSTN基因進(jìn)行研究，采用克隆測(cè)序結(jié)合PCR-SSCP標(biāo)記的方法，檢測(cè)了這些基因部分編碼區(qū)的SNPs，并分析了突變位點(diǎn)導(dǎo)致的多態(tài)性與體重和皮長(zhǎng)性狀之間

2、的相關(guān)性。為利用與生長(zhǎng)性狀相關(guān)的標(biāo)記基因進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇打下基礎(chǔ)；為水貂品種的選育、提高水貂生長(zhǎng)速度、皮張質(zhì)量提供分子水平的手段和方法。主要研究結(jié)果如下： (1)成功克隆了水貂的GH基因的部分DNA序列，得到了1060bp的序列。從序列比較中可知該片段存在三個(gè)突變位點(diǎn)(分別在第269、538和539位點(diǎn)處)。 (2)在檢驗(yàn)的2對(duì)GH基因的引物中，我們發(fā)現(xiàn)2對(duì)引物的擴(kuò)增片段均具有多態(tài)性。引物GH1擴(kuò)增片段經(jīng)PCR-SSCP

3、檢測(cè)，在水貂群體中出現(xiàn)3種基因型(命名為AA、BB、AB)。BB基因型個(gè)體體重及皮長(zhǎng)均顯著高于AA基因型和AB基因型個(gè)體(P＜0.05)，因此可以初步判定B基因可能對(duì)水貂生長(zhǎng)有利。引物GH2擴(kuò)增片段經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，在水貂群體中出現(xiàn)3種基因型(命名為CC、CD、DD)；三種基因型個(gè)體對(duì)水貂體重、皮長(zhǎng)性狀的影響均未達(dá)到顯著水平(P＞0.05)。 (3)在檢測(cè)的3對(duì)IGF-Ⅰ基因的引物中，我們發(fā)現(xiàn)2對(duì)引物的擴(kuò)增片段具有多態(tài)性。

4、引物IGF-Ⅰ1擴(kuò)增片段多態(tài)性經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，在水貂群體中出現(xiàn)2種基因型(命名為AA、AB)。A等位基因出現(xiàn)的頻率在整個(gè)檢測(cè)群體中顯著高于B等位基因。但統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，AB基因型個(gè)體體重及皮長(zhǎng)均極顯著高于AA基因型個(gè)體(P＜0.01)，因此初步判定B等位基因是優(yōu)勢(shì)基因。引物IGF-Ⅰ2擴(kuò)增片段經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，在水貂群體中出現(xiàn)3種基因型(命名為CC、CD、DD)。三種基因型個(gè)體對(duì)水貂體重、皮長(zhǎng)性狀的影響均未達(dá)到顯著水平(P＞

5、0.05)。引物IGF-Ⅰ3擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)沒(méi)有出現(xiàn)多態(tài)。 (4)成功克隆了水貂的EGF基因的部分外顯子DNA序列，得到了1002bp的序列。經(jīng)同源性比較得出與小家鼠的EGF基因的同源性達(dá)到94％；與褐鼠EGF基因同源性達(dá)83％；與獼猴的EGF基因同源性為79％；與人類的EGF基因同源性為78％。從序列比較中可知該片段存在三個(gè)突變位點(diǎn)(分別在45、196和498位點(diǎn)處)。在3個(gè)突變位點(diǎn)兩端設(shè)計(jì)引物，經(jīng)PCR-SSC

6、P檢測(cè)，有2對(duì)引物擴(kuò)增片段出現(xiàn)了多態(tài)。引物EGF1擴(kuò)增片段經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，出現(xiàn)3種基因型(命名為AA、AB、BB)。B等位基因出現(xiàn)的頻率在整個(gè)檢測(cè)群體中高于A等位基因。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，BB基因型個(gè)體體重及皮長(zhǎng)均顯著高于AA基因型個(gè)體(P＜0.05)，AB型個(gè)體體重也顯著高于AA型個(gè)體(P＜0.05)，AB型個(gè)體皮長(zhǎng)與AA、BB型個(gè)體差異均不顯著(P＞0.05)。因此可以初步判定B等位基因可能是優(yōu)勢(shì)基因。引物EGF2擴(kuò)增片段經(jīng)PCR

7、-SSCP檢測(cè)，在水貂群體中出現(xiàn)3種基因型(命名為CC、CD、DD)。三種基因型個(gè)體對(duì)水貂體重的效應(yīng)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示均未達(dá)到顯著水平(P＞0.05)。對(duì)皮長(zhǎng)性狀影響，CD型個(gè)體顯著高于CC型(P＜0.05)，二者和DD型個(gè)體均沒(méi)有顯著差異(P＞0.05)。引物EGF3擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)沒(méi)有出現(xiàn)多態(tài)。 (5)成功克隆了水貂的MSTN基因的外顯子DNA序列，得到了1128bp的序列。經(jīng)同源性比較得出與犬的MSTN基因的同源性

8、達(dá)到94％：與狐的MSTN基因同源性達(dá)93％；與小鼠同源性為85％；與野豬的MSTN基因同源性為94％；與牛的MSTN基因同源性為86％；與人類的MSTN基因同源性為93％。從序列比較中可知該片段存在四個(gè)突變位點(diǎn)(分別在第186、380、616及648位點(diǎn)處)。在4個(gè)突變位點(diǎn)兩端設(shè)計(jì)引物，經(jīng)PCR-SSCP檢測(cè)，3對(duì)引物擴(kuò)增片段均出現(xiàn)了多態(tài)。 (6)采用RAPD標(biāo)記和SCAR標(biāo)記技術(shù)對(duì)水貂的自咬癥發(fā)病原因進(jìn)行遺傳分析時(shí)，100條

9、隨機(jī)引物中，篩選出26條產(chǎn)生清晰、穩(wěn)定擴(kuò)增產(chǎn)物的引物，其中18條引物出現(xiàn)多態(tài)性，多態(tài)率為26.67％。篩選出的26條隨機(jī)引物，在水貂健康組與患病組以相同條件進(jìn)行了3次重復(fù)擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)果顯示，有11條引物擴(kuò)增的結(jié)果重復(fù)性較好、多態(tài)片段明顯(分別是S103，S112，S120，S139，S144，S167，S176，S178，S356，S358，S360)。其中引物S103和S356擴(kuò)增的條帶共性與差異標(biāo)記最明顯，針對(duì)其擴(kuò)增出的不同標(biāo)記片段