脊髓損傷后一氧化氮合酶的表達(dá)特征及其反義核酸的應(yīng)用研究.pdf

1、目的:通過研究不同類型的NOS在損傷后動物脊髓組織中的分布、表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的改變情況,評價不同類型NOS在脊髓繼發(fā)性損傷反應(yīng)中的作用;應(yīng)用與NOS對應(yīng)的反義寡脫氧核苷酸(ASODN)改變脊髓損傷后NOS基因的表達(dá),觀察對脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的影響,對脊髓損傷的發(fā)生機(jī)理和治療途徑做初步的探討.方法:1、制備大鼠脊髓壓迫傷模型,分別于大鼠脊髓壓迫傷后6、12、24、48、72h等5個時間點(diǎn),用免疫組織化學(xué)和圖像分析的方法判斷脊髓損傷后

2、不同類型NOS在大鼠脊髓組織中的分布和表達(dá)情況,確定何種與脊髓損傷后的繼發(fā)性損傷有關(guān),并用透射電鏡觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)改變;2、p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在損傷后的改變情況通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)特異性抑制劑SB203580并結(jié)合Western blotting方法進(jìn)行檢測;3、根據(jù)前兩部分的結(jié)論,應(yīng)用與脊髓損傷相關(guān)的NOS脂質(zhì)體介導(dǎo)的反義寡脫氧核苷酸進(jìn)行動物體內(nèi)治療,通過RT-PCR技術(shù)檢測NOS-mRNA的改變,用分光光度法測定組織中NO含量和N

3、OS活性,觀察脊髓損傷后神經(jīng)功能的恢復(fù)情況:包括動物行為學(xué)、神經(jīng)電生理、MRI和病理組織學(xué)等指標(biāo),傷段脊髓組織細(xì)胞凋亡的改變程度通過流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行研究,最后推測NOS在脊髓損傷中的表達(dá)特征、作用機(jī)理和可能的治療途徑.結(jié)論:脊髓損傷后脊髓組織中主要表達(dá)iNOS和nNOS,并存在p38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改變和細(xì)胞凋亡,脊髓損傷后應(yīng)用NOS反義核酸可以使脊髓損傷后神經(jīng)功能得到改善,iNOS活性變化對脊髓損傷的恢復(fù)更具決定作用,其作用與對細(xì)