一氧化氮合酶對(duì)腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、【研究背景】創(chuàng)傷性腦損傷(Traumaticbraininjury,TBI)后存在著原發(fā)和繼發(fā)兩種病理改變。目前的研究認(rèn)為，凋亡是引起TBI后繼發(fā)性腦損傷的重要原因。腦組織損傷后，神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)會(huì)出現(xiàn)凋亡和抗凋亡信號(hào)的激活，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)細(xì)胞的凋亡過(guò)程。Fas和Bcl-2均參與了這一過(guò)程。Fas可以促進(jìn)腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡，而B(niǎo)cl-2在腦損傷后的抗凋亡過(guò)程中起了重要的作用。此外，腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞的損傷與NO／NOS系統(tǒng)有著密切的關(guān)系。NO

2、又稱(chēng)內(nèi)皮舒張因子，其生成需要一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的參與。根據(jù)其特點(diǎn)，NOS可分為二種亞型：結(jié)構(gòu)型NOS(constructivenitricoxidesynthase，cNOS)和誘生型NOS(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)。cNOS又包括神經(jīng)型NOS(neuronalNOS，nNOS)和內(nèi)皮型NOS(endothelialNOS，eNOS)。研究表明，NO

3、與神經(jīng)細(xì)胞的凋亡有密切的關(guān)系，但是不同的NOS對(duì)腦損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及其與Bcl-2、Fas的關(guān)系還不能確定。 【目的】探討腦損傷后，nNOS和iNOS對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響及其相關(guān)機(jī)制。 【方法】330只大鼠隨機(jī)分成以下五組：正常對(duì)照組、假手術(shù)組、腦創(chuàng)傷組、7-NI(7-Nitroindazole，7-li肖基吲唑。是nNOS抑制劑)組和AG(Aminoguanidine,氨基胍。是iNOS抑制劑)組。后四組分別劃

4、分為傷后3、6、12、24、48、72、168、336小時(shí)8個(gè)時(shí)相組，每個(gè)時(shí)相組及正常對(duì)照組均為10只大鼠。采用Marmarou法制造大鼠重型彌漫性顱腦創(chuàng)傷模型，運(yùn)用HE染色法觀察了腦損傷后大鼠海馬CAl區(qū)損傷情況，并運(yùn)用原位末端標(biāo)記TUNEL法和免疫組織化學(xué)法，觀察了各組大鼠腦損傷后的不同時(shí)相點(diǎn)，海馬CAI區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡情況和Bcl-2、Fas的表達(dá)情況。 【結(jié)果】1、腦創(chuàng)傷組于傷后6小時(shí)，鏡下可見(jiàn)大鼠海馬CAl區(qū)出現(xiàn)散在變

5、性壞死神經(jīng)元，并于傷后72h加重，并觀察到廣泛水腫及神經(jīng)元變性壞死改變，與Marmarou所描述的模型表現(xiàn)大致相符。 2、在正常對(duì)照組和假手術(shù)組，大鼠海馬CAI區(qū)偶見(jiàn)TUNEL陽(yáng)性凋亡細(xì)胞；在腦創(chuàng)傷組、7-NI組以及AG組，傷后各時(shí)相點(diǎn)大鼠海馬CAi區(qū)均出現(xiàn)TUNEL陽(yáng)性凋亡細(xì)胞，隨時(shí)間推移，凋亡細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；同腦創(chuàng)傷組同一時(shí)相點(diǎn)相比，7-NI組傷后6h、12h及24h和AG組傷后24h、48h、72h及168h

6、的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯下降(P<0．05)，7-NI組和AG組的其余各時(shí)相點(diǎn)的凋亡細(xì)胞數(shù)目無(wú)明顯改變(P>0．05)。 3、在正常對(duì)照組和假手術(shù)組，大鼠海馬CAI區(qū)偶見(jiàn)Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞；在腦創(chuàng)傷組、7-NI組以及AG組，傷后各時(shí)相點(diǎn)大鼠海馬CAI區(qū)均出現(xiàn)Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞，隨時(shí)問(wèn)推移，Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；同腦創(chuàng)傷組相比，AG組各時(shí)相點(diǎn)的Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯改變(P>0．05)；但在7-NI組傷后6h、

7、12h、24h，同腦創(chuàng)傷組相比，Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增高(P<0．05)，其余各時(shí)相點(diǎn)無(wú)明顯變化(P>0．05)。 4、在正常對(duì)照組和假手術(shù)組，偶見(jiàn)Fas陽(yáng)性細(xì)胞；在腦創(chuàng)傷組、7-NI組以及AG組，傷后各時(shí)相點(diǎn)大鼠海馬CAl區(qū)均出現(xiàn)Fas陽(yáng)性細(xì)胞，隨時(shí)間推移，F(xiàn)as陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)；同腦創(chuàng)傷組相比，7-NI組各時(shí)相點(diǎn)的Fas陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)無(wú)明顯改變(P>0．05)；但在AG組傷后24h、48h、72h及168h，