新細胞粘附分子LSECtin識別活化T細胞的功能及其分子機制.pdf

1、C-型凝集素超家族在機體的天然免疫和繼發(fā)免疫中發(fā)揮著重要功能，主要包括病原微生物的識別與清除以及免疫細胞的識別與遷移等。LSECtin是本實驗室在國際上率先克隆并研究的一種新型凝集素分子，人LSECtin(hLSECtin)cDNA全長141lbp，編碼293個氨基酸，為II型跨膜糖蛋白，與已知的凝集素分子DC-SIGN、DC-SIGNR和CD23為同一家族，共屬于C型凝集素超家族。LSECtin特異表達于肝和淋巴結。由于其含有典型的C

2、RD結構域(糖基識別結構域)，體外證實LSECtin蛋白能夠Ca2+離子依賴性的結合甘露糖，巖藻糖和N一乙酰葡萄糖胺。 本論文中，利用免疫組化結合免疫熒光共定位的實驗方法，~J-FLSECtin表達在肝臟的Kupffer細胞和竇內(nèi)皮細胞，為LSECtin的功能研究奠定了組織學基礎。為了證實LSECtin是免疫細胞粘附分子的假設，篩選了一系列血細胞系，其中活化的人白血病T細胞系Jurkat與sLSECtin—Fc融合蛋白表現(xiàn)出很強

3、的結合能力，進而分析LSECtin能否識別生理狀況下的血細胞，sLSECtin—Fc融合蛋白以及細胞膜表面的LSECtin均能粘附活化的外周血T細胞，這些結果表明LSECtin是肝臟中一種新的活動化T細胞黏附分子。為了鑒定LSECtin在活化T細胞表面的配體，首先通過Far-Western實驗確定了LSECtin在活化T細胞上的配體分子量，進而利用生物質(zhì)譜技術鑒定配體，結果提示CD44為候選配體分子。在此基礎上，進一步確證了LSECti

4、n與CD44互為受體一配體分子對：(1）CD44封閉性抗體能抑制LSECtin與活化T細胞的粘附；(2)純化的LSECtin蛋白能粘附瞬時表達的CD44；(3)純化的CD44蛋白能粘附瞬時及穩(wěn)定表達的LSECtin。配體分子的確立為深刻揭示LSECtin在肝臟的生物學功能提供了強有力的依據(jù)與線索。 體內(nèi)功能的復雜性與多樣性。從活化T細胞中擴增并克隆出多種有代表性的不同剪切形式的CD44，結果表明，LSECtin只與其中幾種形式表

5、現(xiàn)出較強的粘附，提示LSECtin有選擇性的識別特定形成的CD44。在一系列代表性的血細胞株中，LSECtin與高表達CD44s(80kD)(CD44有多種剪切形式，CD44s代表CD44標準型)并同時表達多種形式CD44(95kD/120kD/140kD)的活化Jurkat細胞粘附最強，與高表達CD44s的CEM細胞的粘附次之，而與低表達CD44(120kD)的幾種血細胞不粘附。如前所述，LSECtin含有典型的糖基識別結構域，能鈣離

6、子依賴性的識別糖基，結果表明，LSECtin與活化T細胞的粘附依賴于配體分子的N-連接糖復合物：(1)鈣離子絡合劑和已知的LSECtin糖配基能抑制LSECtin與活化T細胞的粘附；(2)N一糖基化抑制劑Tunicamycin在不降低CD44表達量的情況下大幅度抑制LSECtin與活化T細胞的粘附。上述結果均表明，．LSECtin可能識別活化T細胞表面某種或幾種特殊形式的CD44分子(剪切形式和糖基化形式)， 綜上所述，LSEC