急性腦梗死與6個miniSTR基因座多態(tài)性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat，STR)是重復(fù)單位長度為2～6個堿基對，重復(fù)次數(shù)在數(shù)次至幾十次之間的串聯(lián)重復(fù)DNA序列，是第二代人類遺傳標(biāo)記。MiniSTR是一種新的STR分型技術(shù)，它重新設(shè)計引物，使引物更接近核心重復(fù)序列，擴增的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)產(chǎn)物比STR分型短一些，其長度在50～150bp。由于miniSTR的擴增產(chǎn)物更小，對于降解的微量檢材可

2、以更有效的獲得正確分型。目前許多證據(jù)表明遺傳因素和免疫因素在腦梗死的發(fā)病中有顯著作用，普遍認(rèn)為腦梗死是由多個基因和環(huán)境因素共同作用導(dǎo)致的一類極其復(fù)雜的疾病。越來越多的學(xué)者開始關(guān)注遺傳因素在缺血性卒中發(fā)病進程中所起到的作用，也逐漸意識到不同個體的易感性差異在腦血管病發(fā)生機制中具有重要意義，腦梗死的分子遺傳學(xué)研究引起了人們的重視。國外有研究報道腦梗死的確與某些STR基因座的多態(tài)性有關(guān)。本研究選擇了D10S1248、D14S1434、D22S

3、1045、D1S1677、D2S441、D4S2364共6個具有較高多態(tài)性的miniSTR基因座，首次將該6個基因座應(yīng)用于急性腦梗死易感基因的研究，對腦梗死的易感基因和保護基因進行探索，為研究腦梗死的發(fā)病機制提供一定的線索。 方法：選取大連市中心醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院患者，全部病例診斷按照全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的標(biāo)準(zhǔn)確診，共計40例。均系無血緣關(guān)系的大連漢族個體，年齡在46-88歲，并除外糖尿病、原發(fā)高血壓和腦腫瘤患者作為病例

4、組。隨機選取大連地區(qū)無償獻血志愿者133名，身體健康，體檢標(biāo)準(zhǔn)符合“全國采供血管理規(guī)范”。家族無遺傳病史，年齡在18-55歲，均無血緣關(guān)系作為對照組。留取外周血樣2ml EDTA抗凝，用Chelex-100法提取基因組DNA。按照引物序列合成上下游引物，上游引物5'端加熒光?；蜃鵇10S1248和D4S2364帶的熒光染料是6-FAM，發(fā)藍(lán)色熒光；基因座D14S1434和D2S441帶的熒光染料是HEX，發(fā)綠色熒光；基因座D22S10

5、45和D1S1677帶的熒光染料是TAMRA，發(fā)黃色熒光。應(yīng)用熒光標(biāo)記多重PCR擴增技術(shù)在兩個同一反應(yīng)體系中同時擴增3個基因座，分兩個反應(yīng)體系。310遺傳分析儀進行毛細(xì)管電泳，用基因收集和分析軟件進行數(shù)據(jù)信息的收集并確定基因型。用直接計數(shù)法計算等位基因頻率和基因型頻率，應(yīng)用SPSS統(tǒng)計軟件對病例組和對照組的各基因座的各個等位基因間進行卡方檢驗，計算OR值，并對有意義的OR值進行假設(shè)檢驗。結(jié)果：1．等位基因和基因型：基因座D10S1248

6、，病例組和對照組分別檢測到等位基因8個和7個，基因型13種和18種；基因座D14S1434，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和8個，基因型12種和18種；基因座D22S1045，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和9個，基因型11種和19種；基因座D1S1677，病例組和對照組分別檢測到等位基因6個和8個，基因型10種和15種；基因座D2S441，病例組和對照組分別檢測到等位基因7個和9個，基因型14種和24種；基因座D4S236

7、4，病例組和對照組分別檢測到等位基因4個和5個，基因型7種和10種。2．等位基因頻率比較：基因座D10S1248和D22S1045的各個等位基因頻率病例組與對照組間均無顯著性差異?；蜃鵇14S1434在病例組中的等位基因14、基因座D1S1677的等位基因11、基因座D2S441病例組的等位基因14和基因座D4S2346的等位基因7的基因頻率在病例組和對照組間有顯著性差異。上述有差異的等位基因OR值分別為0.433、28.71、2.3