MTHFR基因及纖維蛋白原基因多態(tài)性與腦梗死的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分 目的：驗(yàn)證液相芯片技術(shù)檢測(cè)亞甲基四氫葉酸還原酶（Methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)677 C/T基因和纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)bg）β鏈-455G/A、-148C/T、448G/A基因多態(tài)性準(zhǔn)確性和可靠性。方法：PCR法擴(kuò)增99例腦梗死患者及103例正常對(duì)照者的基因組DNA，并獲取目的片段，根據(jù)GenBank上基因多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)相應(yīng)探針，將合成的探針與熒光編碼的微球

2、偶聯(lián)，再將偶聯(lián)了探針的微球與目的片段雜交，在液相芯片儀進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果：（1）確立當(dāng)?shù)任换蛲蛔兟试冖?<等位基因突變率<0.25時(shí)，該SNP位點(diǎn)為純合野生基因型；②0.40<等位基因突變率<0.70，該位點(diǎn)為雜合突變基因型；③0.80<等位基因突變率<1時(shí)，該位點(diǎn)為純合突變基因型；（2）樣本測(cè)序分析結(jié)果與上述判斷標(biāo)準(zhǔn)所得出的基因型相比較，準(zhǔn)確率可達(dá)99.2％；（3）液相芯片技術(shù)檢測(cè)基因多態(tài)性位點(diǎn)基因型重復(fù)性分析結(jié)果顯示變異系數(shù)在2.

3、5％-18.5％之間。結(jié)論：利用液相芯片技術(shù)建立的MTHFR677C/T、Fbgβ-455G/A、Fbgβ-148C/T及Fbgβ448G/A SNP檢測(cè)方法具有準(zhǔn)確度高、可靠性好的優(yōu)點(diǎn)，可用于開展大樣本的臨床檢測(cè)。
　　 第二部分 目的：(1）探討MTHFR677C/T、Fbgb鏈 448G/A基因多態(tài)性與腦梗死間的關(guān)系；(2）探討高同型半胱氨酸血癥與腦梗死、MTHFR677C/T基因多態(tài)性間的關(guān)系。方法：(1）應(yīng)用病例-對(duì)照

4、研究對(duì)腦梗死患者及正常對(duì)照者進(jìn)行分析；(2）應(yīng)用液相基因芯片檢測(cè)90例腦梗死患者和103例正常對(duì)照MTHFR677C/T、Fbgb 448G/A位點(diǎn)的基因多態(tài)性；(3）高效液相色譜法檢測(cè)90例腦梗死患者和50例正常對(duì)照血漿同型半胱氨酸濃度。結(jié)果：(1）Fbg448A等位基因及GG、GA、AA基因型頻率分布在腦梗死組與對(duì)照組中無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；(2）MTHFR677C/T基因的T等位基因及雜合、純合突變基因型頻率在腦梗死組均高

5、于對(duì)照組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；（3）腦梗死組的血漿同型半胱氨酸濃度為14.47±10.19μmol/L，高于對(duì)照組11.06±5.67μmol/L，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030)，多元Logistic回歸分析排除年齡、性別、飲酒等影響因素，比值比（Odds Ratio，OR）=1.842，95％可信區(qū)間（Confidence interval，CI）：1.129-3.004；性別分層后，女性腦梗死組同型半胱氨酸濃度

6、與對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.039），男性病例組對(duì)照組間同型半胱氨酸濃度則無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.171）；（4）在全部研究對(duì)象組及腦梗死組中同型半胱氨酸濃度在MTHFR677TT基因型攜帶者明顯高于CC、CT基因型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：（1）Fbg448G/A、MTHFR677C/T基因多態(tài)性與腦梗死無相關(guān)性；(2）高同型半胱氨酸可能是腦梗死的易患危險(xiǎn)因素，尤其是女性群體。（3）MTHFR677TT基因型可