炎癥細(xì)胞因子基因多態(tài)性與血脂、腦梗死相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的： 細(xì)胞因子，根據(jù)其在免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中的作用，可分為促炎癥細(xì)胞因子和抗炎癥細(xì)胞因子。促炎癥細(xì)胞因子自細(xì)胞介素-1β(Interlekin-1β，IL-1β)是免疫反應(yīng)的主要誘導(dǎo)劑，與I型IL-1受體結(jié)合后啟動(dòng)免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)，參與動(dòng)脈粥樣硬化、腦梗死的病理生理機(jī)制。促炎癥細(xì)胞因子腫瘤壞死因子-β(Tumornecrosisfactor-β，TNF-β)是淋巴細(xì)胞在抗原或有絲分裂原刺激下所產(chǎn)生的一種淋巴因子。TNF

2、-β具有復(fù)雜的生物學(xué)活性，可以誘導(dǎo)自身及IL-1、白細(xì)胞介素-6(Interleukin6,IL-6)等其他細(xì)胞因子，廣泛參與炎癥反應(yīng)、免疫系統(tǒng)的發(fā)育和調(diào)節(jié)。抗炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)主要由Th2細(xì)胞產(chǎn)生，具有抑制細(xì)胞免疫和抗炎癥兩大活性。促炎癥細(xì)胞因子和抗炎癥細(xì)胞因子相互影響，在動(dòng)脈粥樣硬化形成、自身免疫性疾病、感染等疾病的發(fā)生、進(jìn)展和預(yù)后的病理機(jī)制中發(fā)揮重要的作用。 研究表明炎

3、癥細(xì)胞因子與脂質(zhì)代謝異常關(guān)系密切，二者互為因果參與疾病的病理生理過程。炎癥細(xì)胞因子可引起脂質(zhì)代謝的改變，導(dǎo)致高脂血癥，這一作用在動(dòng)脈粥樣硬化形成和感染性疾病中得到充分證明。此外，炎癥細(xì)胞因子可通過調(diào)節(jié)低密度脂蛋白(Lowdensitylipoprotein,LDL)受體或肝內(nèi)相關(guān)酶的活性而改變脂質(zhì)代謝穩(wěn)態(tài)。反之，脂質(zhì)代謝紊亂可改變炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生、分泌和作用。脂蛋白可作為促炎癥介質(zhì)，誘導(dǎo)IL-6、TNF、IL-1等炎癥細(xì)胞因子合成和釋

4、放。高脂血癥常伴有各種炎癥細(xì)胞因子血清濃度的改變，尤其是急性時(shí)相蛋白C-反應(yīng)蛋白(C-reactionProtein,CRP)水平的增加。這是炎癥細(xì)胞因子與脂質(zhì)代謝紊亂相關(guān)的又一證據(jù)。 方法： 1.應(yīng)用DNA提取試劑盒提取外周靜脈抗凝血標(biāo)本基因組DNA，于-20℃保存； 2.分別以TaqI、NcoI、RsaI為限制性內(nèi)切酶，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析-瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA標(biāo)本IL-1β+395

5、3、TNF-β+252和IL-10-592位點(diǎn)基因多態(tài)性； 3.由OLYMPUSAU5421大型全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清總膽固醇(Totalcholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyeride，TG)、HDL、LDL和極低密度脂蛋白Verylowdensitylipoprotein,VLDL)的濃度。 結(jié)果： 1.正常人群組IL-1β+3953、TNF-β+252和IL-10-592位點(diǎn)的基因型檢測(cè)。

6、對(duì)428例受試者靜脈血樣本行DNA提取和目的基因擴(kuò)增，剔除無產(chǎn)物者，實(shí)際可用樣本數(shù)為：IL-1β位點(diǎn)336例，TNF-β+252位點(diǎn)376例，IL-10-592位點(diǎn)356例。結(jié)果表明，IL-1β+3953、TNF-β+252和IL-10-592位點(diǎn)分別存在3種基因型。基因型分布分別是：IL-1β+3953位點(diǎn)CC/CT/TT基因型分別占75.30％，23.51％，1.19％；TNF-β+252位點(diǎn)GG/GA/AA基因型分別占22.34％

7、，44.68％，32.98％。IL-10-592位點(diǎn)CC/CA/AA基因型分別占10.96％，41.57％，47.47％。受試者IL-1β+3953、TNF-β+252和IL-10-592三個(gè)位點(diǎn)的各基因型性別和年齡構(gòu)成的差異無顯著性(P>0.05)。 2.正常人群組IL-1β+3953、TNF-β+252和IL-10-592位點(diǎn)的等位基因頻率。IL-1β+3953位點(diǎn)C/T等位基因頻率分別為87.05％，12.95％。TNF-

8、β+252位點(diǎn)G/A等位基因頻率分別為44.68％，55.32％。IL-10-592位點(diǎn)C/A等位基因頻率分別為31.74％，68.26％。本研究數(shù)據(jù)與其他地區(qū)或種族人群比較，等位基因頻率的差異有顯著性。 3.正常人群組各位點(diǎn)基因多態(tài)性與血脂水平關(guān)系的分析，結(jié)果表明：①IL-1β+3953位點(diǎn)不同基因型間(CC、CT、TT)，LDL濃度差異有顯著性(F=3.628，P=0.028)，CT基因型攜帶者的LDL濃度高于CC基因型(2

9、.743±0.723mmol/Lvs。2.502±0.699mmol/L，t=-2.639，P=0.009)。但TC、TG、HDL、VLDL血清濃度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②TNF-β+252位點(diǎn)不同基因型(GG、GA、AA)間TC、LDL水平差異有顯著性(F=3.181，P=0.043；F=3.842，P=0.022)，AG基因型的TC、LDL濃度高于AA型(t=-2.406，P=0.017；t=-2.516，P=0.012

10、)，TG、HDL、VLDL血清濃度差異無統(tǒng)計(jì)意義。③IL-10-592位點(diǎn)基因型間(AA、CA、CC)的TC、TG、HDL、LDL、及VLDL濃度差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 4.參照診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清LDL>3.64mmol/L為異常，將正常人群組受試者分為高-LDL組、正常-LDL組；依據(jù)血清TC>5.72mmol/L為異常分高-TC組、正常-TC組。高-LDL組和正常-LDL組間IL-1β+3953C/T位點(diǎn)等位基因頻

11、率的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.884，P=0.046)，高LDL組IL-1β+3953位點(diǎn)T等位基因攜帶率高于正常-LDL組(22.00％vs.12.25％)。比較三個(gè)位點(diǎn)等位基因頻率在高-TC組和正常-TC組內(nèi)的差異，示IL-10-592C/A和TNF-β+252G/A位點(diǎn)等位基因頻率分布存在差異，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=3.529，P=0.036；X2=7.002，P=0.005)。高-TC組IL-10-592A等位基因和TNF-

12、β+252G等位基因攜帶率更高(73.71％vs.66.34％；52.45％vs.41.64％)。 5.檢測(cè)126例腦梗死患者IL-10-592G/A基因型，有效例數(shù)84例。IL-10-592位點(diǎn)CC/CA/AA基因型分布為9.52％，40.48％，50.00％。腦梗死組基因型分布及等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(X2=7.774，P=0.024；X2=7.063，P=0.005)，腦梗死組IL-10-592A等位

13、基因頻率較對(duì)照組高(70.24％vs。56.86％)。 結(jié)論： 1.中國(guó)漢族人存在IL-1β+3953、TNF-β+252和IL-10-592位點(diǎn)的基因多態(tài)性。三位點(diǎn)均含有2個(gè)等位基因(IL-1β+3953C/T、TNF-β+252G/A、IL-10-592C/A)，和三種基因型(IL-10-592CC/CA/AA；IL-1β+3953CC/CT/TT；TNF-β+252GG/GA/AA)，其分布存在種族或地區(qū)差異。

14、 2.炎癥細(xì)胞因子基因多態(tài)性與血脂水平有關(guān)。IL-1β+3953和TNF-β+252位點(diǎn)不同基因型間(CC、CT、TT)存在LDL水平的差異，后者還存在TC濃度差異。IL-1β+3953位點(diǎn)CT基因型的LDL濃度高于CC型，TNF-β+252位點(diǎn)AG基因型的TC、LDL濃度高于AA型。未發(fā)現(xiàn)IL-10-592位點(diǎn)不同基因型間存在脂質(zhì)指標(biāo)血清濃度差異的顯著性。 3.血脂正常者和高脂血癥患者的IL-1β+3953C/T、TNF-