甘草中有效成分的分離純化、結(jié)構(gòu)鑒定、生物活性測定及活性指紋圖譜研究.pdf

1、中藥有效成分是其發(fā)揮藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，對(duì)評(píng)價(jià)中藥材的質(zhì)量、制定中藥質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)控制、優(yōu)化制劑工藝、揭示中藥作用機(jī)制、實(shí)現(xiàn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。甘草酸和甘草黃酮是中藥甘草中主要的有效成分，目前的分離純化方法存在著繁瑣、工作量大的缺點(diǎn)，用做質(zhì)量控制指標(biāo)成分的標(biāo)準(zhǔn)品也由于制備困難無法滿足市場需求，在活性研究方面也存在某些空白，本論文在甘草有效成分的分離純化，結(jié)構(gòu)鑒定，生物活性測試及指紋圖譜技術(shù)方面進(jìn)行了大量有益的研究探索。 建立了

2、一種采用大孔樹脂吸附解吸甘草提取液制備具有抗?jié)兓钚远鵁o假醛固酮樣副作用的無酸甘草黃酮提取物DGL的簡便有效的方法。采用優(yōu)選出的極性大孔樹脂XDA-1，在最佳分離條件下，甘草總黃酮的回收率為74.8％，無酸提取物中黃酮的純度為21.9％，副產(chǎn)品甘草酸在冰醋酸中重結(jié)晶后HPLC-UV純度達(dá)82.2％，回收率為48％。然后用泡沫分離對(duì)甘草酸進(jìn)行進(jìn)一步純化。甘草酸的富集比隨操作參數(shù)的不同在3.35-12.8之間變動(dòng)。質(zhì)量回收率最高達(dá)72.3％

3、。泡沫液的HPLC-UV純度由82.2％增加為88.5％-91.7％。對(duì)更復(fù)雜的甘草粗提物，富集比為3.84，甘草酸質(zhì)量回收率為50.0％。此方法有望作為柱色譜的前富集方法或柱色譜后的后純化方法富集純化甘草酸。 甘草提取物已被用于美白化妝品中，為研究其物質(zhì)基礎(chǔ)，采用柱層析方法從烏拉爾甘草中分離純化了4個(gè)主要的黃酮類化合物，分別鑒定為甘草甙、異甘草素—葡萄糖芹菜甙、異甘草甙和甘草素。首次評(píng)價(jià)了它們以及甘草查耳酮甲對(duì)蘑菇酪氨酸酶單酚

4、酶活性的影響。動(dòng)力學(xué)研究表明：異甘草素—葡萄糖芹菜甙、異甘草甙和甘草查耳酮甲對(duì)于單酚酶活性均為竟1爭性抑制劑，它們對(duì)蘑菇酪氨酸酶單酚酶活性抑制的IC50分別為0.072mM，0.038mM，0.0258mM，可以作為潛在的食品抗褐變劑和美白化妝品添加劑；甘草甙對(duì)酪氨酸酶沒有抑制作用；而甘草素可提高酪氨酸酶的活性而具有協(xié)同作用，應(yīng)用粗提物時(shí)應(yīng)該去除。以L-DOPA為底物時(shí)，五種化合物均沒有明顯的抑制作用。這些抑制劑對(duì)酪氨酸酶單酚酶和二酚酶

5、活性影響的不同可能與兩種酶活性作用的底物不同有關(guān)。 首次將基于HPLC在線清除DPPH()自由基活性快速篩選自由基清除劑的方法用于甘草中抗氧化劑的篩選，從甘草的氯仿和乙酸乙酯萃取物中分離得到5個(gè)具有清除自由基活性的化合物：dehydroglyasperinD(C5)、glyuralinC(C6)、isoliquiritigenin(C7)、glycycoumarin(C8)、glycyrrhisoflavoneB(C9)，其中C

6、6和C9為首次從甘草中分離得到。離線活性測定表明，C5、C6和C9與抗氧化劑EGC、GC、quercetin、EGCg類似，具有快的動(dòng)力學(xué)特征；C8則與EC、CH和Trolox類似，具有中等動(dòng)力學(xué)特征；C7反應(yīng)則很慢。前5min內(nèi)對(duì)DPPH()自由基的清除率，除C7很低外，其它四種化合物均與EC和CH類似，在33.0～51.1％之間。因此它們可以作為潛在的抗氧化劑用作抗衰老藥物或食品的保鮮劑。 對(duì)于八種不同品種和產(chǎn)地甘草的氯仿相