深圳南山區(qū)腹瀉患兒諾如病毒篩查及其基因分型研究.pdf

1、[目的]
　　1.初步了解深圳南山區(qū)秋冬季臨床嬰幼兒急性腹瀉中輪狀病毒、諾如病毒、星狀病毒，腸道腺病毒的病原分布情況，為臨床防治提供依據(jù)。
　　2.了解深圳南山區(qū)秋冬季感染性病毒腹瀉中諾如病毒的感染情況，并進(jìn)行初步的流行病學(xué)分析，加強(qiáng)對諾如病毒引起感染的監(jiān)測。
　　3.對引起臨床嬰幼兒急性腹瀉的主要病原-諾如病毒進(jìn)行基因分型分析，為諾如病毒疫苗的研究和開發(fā)提供基礎(chǔ)資料。
　　[方法]
　　1.標(biāo)本采集與處理

2、
　　收集深圳市第六人民醫(yī)院（南山醫(yī)院）2009年9月至2010年3月、2010年9月至2011年3月秋冬季5歲以下急性非細(xì)菌性腹瀉嬰幼兒的糞便標(biāo)本617份，標(biāo)本用生理鹽水混勻，制成10％的懸液，于-80℃保存。
　　2.引物設(shè)計(jì)
　　通過查閱參考文獻(xiàn)及通過基因組同源性比對，分別以RV、AstV、NV、EAdV4種病毒核酸序列保守區(qū)為靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)病毒特異性引物。
　　3.多重RT-PCR方法檢測嬰幼兒急性腹瀉常見病

3、毒:RV、AstV、NV。單重PCR法篩查臨床腹瀉標(biāo)本EAdV
　　4.用BECKMAN COULTER公司生產(chǎn)的CEQ8800測序儀對NV PCR篩查陽性標(biāo)本進(jìn)行基因測序分型。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0對計(jì)數(shù)資料進(jìn)行卡方檢驗(yàn)(x2test)或者確切概率法，雙側(cè)α=0.05，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　[結(jié)果]
　　1.在617份標(biāo)本中，共檢出291例至少感染一種腹瀉

4、病毒，總檢出率為47.16％(291/617)，其中265例為一種病毒感染，26例為混合感染。四種腹瀉病毒以RV感染為主，檢出率為32.90％(203/617);其次是EAdV，檢出率為9.24％(57/617); NV檢出率為7.13％(44/617); AstV檢出率為1.94％(12/617)。
　　2.在265例單一腹瀉病毒感染標(biāo)本中，RV陽性率為67.92％(180/265);NV陽性率為14.72％(39/265);A

5、stV陽性率為3.77％(10/265); EAdV陽性率為13.58％(36/265)。291份陽性標(biāo)本中混合感染共26例，占8.93％(26/291)，以RV合并其他病毒感染為主，占92.31％(24/26)，兩種混合感染25例，主要以RV和EAdV混合感染為主，占73.08％(19/26);2例RV和NV混合感染，1例RV和AstV混合感染;1例EAdV和AstV混合感染。三種病毒混合感染1例為RV、NV和EAdV混合感染。

6、>　　3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，NV感染性腹瀉發(fā)病高峰季節(jié)在10～11月份，占65.91％（29/44）。NV感染年齡在2歲以下的，占86.36％(38/44)，7-12個月的嬰幼兒感染率，占20.45％（9/44），與1-6個月的嬰幼兒比較，感染率有明顯差異。NV混合感染率為11.36％(5/44)，較RV、AstV比較，混合感染率無明顯差異，與EAdV比較，混合感染率有明顯差異。男性感染率為45.45％(20/44)，女性感染率為54.55

7、％(24/44)，男孩、女孩感染率無明顯差異。
　　4.NV基因分析顯示，測序的40株均屬于GⅡ-4型，不同毒株間核酸序列同源性為98％～100％。
　　[結(jié)論]
　　1.RV、EAdV和NV是引起深圳市南山區(qū)嬰幼兒急性腹瀉的主要病毒致病原，混合感染以RV聯(lián)合其他病毒感染為主，臨床上應(yīng)根據(jù)所感染病原體制定有針對性的診治措施。
　　2.NV是深圳市南山區(qū)7-12個月嬰幼兒病毒性腹瀉的主要病原體，感染較易發(fā)生10、1