髓系細(xì)胞特異性Sptlc2基因缺失對小鼠動脈粥樣硬化病灶的影響.pdf

1、目的:
　　 絲氨酸棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶(Serine Palmitoyltransferase，SPT)是鞘磷脂從頭合成途徑中的第一個限速酶。SPT是一種膜蛋白，有三個亞基:LCB1，LCB2和LCB3。SPT和鞘磷脂已經(jīng)被證實能影響動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)，而巨噬細(xì)胞是已知的在動脈粥樣硬化發(fā)展中起關(guān)鍵作用的細(xì)胞。巨噬細(xì)胞由髓系細(xì)胞分化而來，巨噬細(xì)胞和髓系細(xì)胞SPT對動脈粥樣硬化的作用還不清楚。為了解答這個

2、問題，我們構(gòu)建了髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠模型，研究其對動脈粥樣硬化病灶的影響，為尋找治療動脈粥樣硬化新的途徑或靶點提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)通過采用Sptlc2-Flox（Sptlc2-10xp/loxp）小鼠和轉(zhuǎn)基因(Lysozyme M cre，LysM-cre)小鼠雜交，構(gòu)建髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠，并運用基因?qū)W方法鑒定小鼠構(gòu)建成功與否。
　　 (2)通過骨髓移植的方

3、法，移植髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的骨髓到Ldlr-/-小鼠體內(nèi)。骨髓移植后，小鼠喂以高脂高膽固醇飼料12周，促進(jìn)動脈粥樣硬化病灶生成。
　　 (3)骨髓移植前，檢測小鼠的血細(xì)胞數(shù)目;骨髓移植后第8周末，驗證小鼠的基因型;高脂高膽固醇飼養(yǎng)第8周末，檢測小鼠的血細(xì)胞數(shù)目和血脂含量。
　　 (4)高脂高膽固醇飼養(yǎng)第12周末，全面分析小鼠主動脈弓、主動脈根部和完整主動脈的動脈粥樣硬化病灶大小。
　　 結(jié)果:<

4、br>　　 (1)構(gòu)建髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠后，我們得到的小鼠子代有兩種基因型:一種是有LysM-cre的表達(dá)，這種小鼠的髓系細(xì)胞Sptlc2基因雜合性缺失;另一種是沒有LysM-cre的表達(dá)，這種小鼠的髓系細(xì)胞Sptlc2基因表現(xiàn)型正常?；?qū)W鑒定表明，髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠構(gòu)建成功。
　　 (2)骨髓移植8周后，基因?qū)W鑒定表明，骨髓移植是成功的，且造血干細(xì)胞完全被替換。骨髓移植前后，和對照組相比

5、，髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的血細(xì)胞數(shù)目沒有明顯差異。骨髓移植后，Ldlr-/-小鼠在喂以高脂高膽固醇飼料第8周末，已形成高脂血癥，為動脈粥樣硬化病灶的形成提供了有利條件。
　　 (3)在喂以高脂高膽固醇飼料12周后，兩組Ldlr-/-小鼠都有動脈粥樣硬化病灶。和對照組相比，髓系細(xì)胞特異性Sptlc2+/-小鼠的主動脈弓粥樣硬化病灶明顯減少、主動脈根部病灶面積顯著性減少35％、完整主動脈粥樣硬化病灶面積顯著性減少30％