急性腦血管病一氧化氮合酶基因多態(tài)性及其表達(dá)研究.pdf

1、、l0些主型堇查堂旦墮墾蘭墮：Z。：玉：堡主蘭堡壘蘭t√急性腦血管病一氧化氮合酶基因多態(tài)性及其表達(dá)研究／博士研究生方玲j指導(dǎo)教師童萼塘教授(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，武漢430022)■一●第一部分大鼠局灶性腦缺血及缺血再灌注后腦內(nèi)NOS的表達(dá)目的：了解局灶性腦缺血及缺血再灌注后腦內(nèi)三型一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的表達(dá)，為治療腦缺血提供理論依據(jù)。／方法：將60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為假

2、手術(shù)組，永久性局灶性腦缺血15rain、30min、lh、2h、3h、6h、24h7組，及短暫性局灶性腦缺血2h再灌注15min、缺血2h再灌注22h組，每組動(dòng)物6只。腦缺血模型采用線栓法中動(dòng)脈梗塞模型。腦組織中nNOS，iNOS，eNOS蛋白的檢測(cè)采用在腦組織連續(xù)切片上行三型NOS的多克隆抗體SP免疫組化技術(shù)。結(jié)果：(1)永久性腦缺血6h內(nèi)腦內(nèi)三型NOS的表達(dá)情況：缺血1h內(nèi)缺血區(qū)紋狀體nNOS上調(diào)表達(dá)，缺血區(qū)內(nèi)毛細(xì)血管，小至中血管出

3、現(xiàn)eNOS表達(dá)。缺血3h可見(jiàn)缺血區(qū)內(nèi)eNOS陽(yáng)性血管多于對(duì)側(cè)未缺血區(qū)。(2)永久性腦缺血亞急性期腦內(nèi)三型NOS的表達(dá)情況：腦缺血24h時(shí)，在梗塞區(qū)內(nèi)出現(xiàn)大量iNOS陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞。(3)短暫性腦缺血2h再灌注腦內(nèi)三型NOS的表達(dá)：缺血2h再灌注15min，可見(jiàn)在缺血區(qū)的周圍有eNOS陽(yáng)性細(xì)胞圍繞缺血區(qū)分布。再灌注22h，梗塞灶內(nèi)有iNOS陽(yáng)性的小膠質(zhì)細(xì)胞侵潤(rùn)。在梗塞周邊出現(xiàn)eNOS及iNOS陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)胞及血管。結(jié)論：腦缺血不同時(shí)期腦

4、內(nèi)表達(dá)的NOS不同。(1)急性期出現(xiàn)nNOS及eNOS上調(diào)表達(dá)：(2)亞急性期出現(xiàn)iNOS的上調(diào)表達(dá)；(3)缺血再灌注早期出現(xiàn)eNOS上調(diào)表達(dá)，亞急性期出現(xiàn)iNOS及eNOS上調(diào)表達(dá)。提示nNOS可能與腦缺血早期神經(jīng)損傷機(jī)制有關(guān)，而iNOS與遲發(fā)性神經(jīng)損傷機(jī)制有關(guān)。因此在用NOS抑制劑治療時(shí)要注意根據(jù)缺血不同時(shí)期選擇用藥。關(guān)鍵詞：墮墊；里!整塾要窺矍蠶—壹絲童氫金酶；大鼠p～，_一‘M_p_口r’“～_d_H一，蘭型墊盔堂旦墮墾蘭墮壁主

5、堂垡笙苧PoiymorphismandexpressionofnitricoxidesynthasegeneinacutecerebrovasculardiseaseDoctoralCandidateFangLingSupervisorProfTongEtang(DeptofNeurologyUnionHospital，TongiMedicalColleage，HuaZhongScience&TechnologyUniversityWa

6、han430022)PartIExpressionofnitricoxidesynthaseafterfocalcerebralischemiaandreperfusioninratObjective：TostudytheimmunoreactiviWofthreeisoformsofnitricoxidesynthase(NOS)afterpermanentfocalcerebralischemiaandtransientischem

7、iareperfusioninratMethods：60maleSDratsweredividedintoshamoperated，focalcerebralischemiaandischemia—reperfusiongroupThefocalcerebralishemiagroupwassubdividedinto7groups：ischemiafor15min，30rain，lh，2h，3h，6hand24hThereperfus

8、ionwassubdividedinto2groups：ischemia2hplusreperfusion15minandischemia2hplusreperfusionfor22hPermanentischemiaandtransientischemiareperfusionwasinducedbyreversiblemiddlecerebra／arteryocclusionthroughmonofilamentnylonsutur

9、eTheexpressionofneuronalNOS(nNOS)，inducibleNOS(iNOS)andendothelialNOS(eNOS)weredetectedby3kindsofNOSpolycloneantibodySPimmuchemistytechniqueResults：(1)ExpressionofthreeisoformNOSinischemicbrainduringfirst6hours：theexpres