β胡蘿卜素在香煙煙霧溶液誘導人肺細胞DNA損傷中的作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本研究以ATBC和CARET人群干預試驗為背景,結合γH2AX反映DNA損傷的特性,采用γH2AX熒光抗體識別技術,探討不同劑量的β-胡蘿卜素在香煙煙霧溶液誘導人肺細胞DNA損傷中的不同作用,目的是為全面評價β-胡蘿卜素的安全性,合理補充β-胡蘿卜素提供科學依據。 研究方法:本研究采用體外實驗的方法。選用A549細胞,選定合適的香煙煙霧溶液(CSS)濃度及作用時間,建立CSS對細胞損傷的模型。設置β-胡蘿卜素各劑量組,在細胞培養(yǎng)

2、48h后,加入不同濃度的含β-胡蘿卜素的培養(yǎng)液,同時設立0.5%DMSO作為溶劑對照組,培養(yǎng)24h后,加入CSS作用1h,并且設立0.5mmol/L雙氧水作為陽性對照組,采用γH2AX抗體識別免疫熒光技術,一抗選用鼠源γH2AX單抗,二抗選用山羊抗鼠FITC標記的抗體,用免疫熒光顯微鏡定性及半定量檢測,用流式細胞技術定量熒光強度。實驗每組設立三個平行孔,實驗重復三次。免疫熒光顯微鏡圖片用ImageProPlus軟件進行γH2AX焦點定量

3、計數(shù),結果采用CMH卡方檢驗;流式細胞熒光強度結果用陽性細胞數(shù)和平均熒光強度表示。 研究結果: 免疫熒光顯微鏡檢測細胞核內γH2AX焦點數(shù)目結果顯示:空白組和單獨各濃度β-胡蘿卜素濃度組與溶劑對照組相比沒有顯著性差異,表明單獨β-胡蘿卜素不能引起A549細胞產生DNA損傷;0.1支/ml的CSS與對照組相比有顯著性差異,表明單獨的CSS能引起A549細胞產生DNA損傷;0.1μmol/Lβ-胡蘿卜素+CSS組與單獨CSS

4、組相比不具有顯著性差異,表明該濃度的β-胡蘿卜素對由0.1支/mlCSS誘導A549細胞產生的DNA損傷沒有明顯影響;0.5~10.0μmol/Lβ-胡蘿卜素+CSS組與單獨CSS組誘導的A549細胞DNA損傷具有顯著性差異,而且這種差異經CMH卡方趨勢檢驗,也有顯著性,表明0.5~10.0μmol/Lβ-胡蘿卜素對由CSS誘導的A549細胞產生的DNA損傷具有促進作用,且隨著β-胡蘿卜素濃度的增加促進作用增強。流式細胞儀檢測陽性細胞數(shù)

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