酮基類胡蘿卜素的檢測、代謝研究及對HaCaT細胞紫外線損傷的作用.pdf

1、研究在裝備了二極管陣列檢測器(PDA)的高壓液相色譜(HPLC)上,應用C18、C30柱子分離與鑒定酮基類胡蘿卜素的方法：分析北京市場上的5種食用蝦中酮基類胡蘿卜素的含量與組成；探索酮基類胡蘿卜素在大鼠體內器官以及血清中的積累情況；研究酮基類胡蘿卜素對人角質形成細胞(HaCaT)增殖的影響；研究酮基類胡蘿卜素在長波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)照射后HaCaT細胞損傷中的防治作用。 方法： C18色譜柱為Diam

2、onsilTM,流動相為酸性乙腈-水、乙酸乙酯,線性梯度洗脫,流速1.0 ml.min-1,檢測波長480nm,波長范圍280-580nm,進樣量20μl;C30色譜柱為Waters YMC Carotenoid S-5,流動相酸性乙腈.水、甲基叔丁基醚,線性梯度洗脫,流速1.0ml.min-1,檢測波長480nm,波長范圍250nm-600nm,進樣量20μl。 酮基類胡蘿卜素灌胃雄性SD大鼠后收集其血清、臟器及糞便,萃取其中

3、的酮基類胡蘿卜素組分,C30-HPLC-PDA對萃取物進行分離并測其幾何異構體的組成。 分別用一定劑量的UVA和UVB照射HaCaT細胞,立即加入含有酮基類胡蘿卜素的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)24小時后檢測細胞上清液中乳酸脫氫酶水平,通過MTT法檢測細胞增殖情況,并與單照射UVA或UVB的對照組及未照UV也未加酮基類胡蘿卜素的空白組進行比較。 結果： 應用C18-HPLC-PDA和C30-HPLC-PDA酸性流動相中,酮基

4、類胡蘿卜素得到了良好的分離,可以利用此法鑒定酮基類胡蘿卜素。 蝦青素單體在大鼠血清中及脾臟中均有積累。斑蝥黃質在大鼠體內的消化、吸收、血液運輸和肝臟代謝中,未發(fā)現(xiàn)順式異構體比例的上升。灌胃2小時后大鼠血清中斑蝥黃質的積累達到最高水平。 酮基類胡蘿卜素能顯著提高HaCaT細胞的增殖率,能降低UV輻照后細胞上清液中的乳酸脫氫酶水平。 結論： 通過比較色譜行為和光譜特征,酮基類胡蘿卜素類化合物可被鑒定,這使C1