小細(xì)胞肺癌化療耐藥microRNAs的分析及預(yù)測(cè)研究.pdf

1、目的:小細(xì)胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)以腫瘤細(xì)胞倍增時(shí)間短、早期轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)性為特點(diǎn),近年來(lái)發(fā)病率不斷增長(zhǎng)?；熓荢CLC的主要治療手段,多數(shù)患者對(duì)化療藥物非常敏感,但化療后極易復(fù)發(fā),目前認(rèn)為化療耐藥是導(dǎo)致SCLC復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素。復(fù)發(fā)性SCLC患者二線化療的有效率主要取決于一線化療后緩解期長(zhǎng)短。緩解期短于3個(gè)月的患者具有高度耐藥性。miRNA(microRNA,小RNA)是一類長(zhǎng)約22nt非編碼RNA,可通

2、過(guò)與特定mRNA結(jié)合或調(diào)節(jié)特定mRNA的蛋白質(zhì)翻譯過(guò)程來(lái)調(diào)控基因的表達(dá),廣泛參與動(dòng)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育、分化、增殖與凋亡、激素分泌及腫瘤形成等多種重要生物過(guò)程。近年研究報(bào)道m(xù)iRNA與腫瘤化療耐藥密切相關(guān)。本研究收集SCLC臨床病例,根據(jù)緩解期進(jìn)行分組,采用miRNA芯片檢測(cè)化療耐藥miRNA表達(dá)譜,篩選差異表達(dá)的miRNA,并預(yù)測(cè)受其調(diào)控的靶基因,以期探尋SCLC化療耐藥性的分子機(jī)制,尋找可能的治療干預(yù)的靶點(diǎn),為臨床治療提供理論依據(jù)。<

3、br>　　方法:收集我院2011年1月-2012年12月經(jīng)病理組織學(xué)和/或細(xì)胞學(xué)檢查確診的未行手術(shù)且為初治的SCLC患者血清。根據(jù)緩解期不同分為3組:A組(緩解期≤3月),B組(3月<緩解期<6月),C組(緩解期≥6月)。采用miRNA基因芯片方法檢測(cè)組間差異表達(dá)的miRNA,對(duì)其中差異顯著的miRNA進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證。利用TargetScan等在線軟件預(yù)測(cè)miRNA的潛在靶基因。
　　結(jié)果:芯片篩查出A組比C組上調(diào)2倍以上

4、的miRNA有5個(gè),A組比C組下調(diào)2倍以上的miRNA有1個(gè),B組比C組上調(diào)2倍以上的miRNA有13個(gè)。其中miR-4728-3p、miR-4443、miR-1825經(jīng)實(shí)時(shí)定量RT-PCR驗(yàn)證,與芯片結(jié)果一致。應(yīng)用TargetScanHuman5.1及PicTar預(yù)測(cè)顯著差異表達(dá)的19個(gè)miRNA的靶基因。經(jīng)GO分析及KEGG分析,發(fā)現(xiàn)這些靶基因參與基因轉(zhuǎn)錄、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞凋亡、增殖、周期變化及細(xì)胞間信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等重要的生物學(xué)過(guò)程。預(yù)測(cè)了

5、兩條信號(hào)通路與SCLC密切相關(guān),即PI3K-AKT信號(hào)通路及P53信號(hào)通路。將miR-1825、miR-4443進(jìn)行靶基因功能富集分析發(fā)現(xiàn),miR-1825的靶基因中ITGA3分布于PI3K-AKT信號(hào)通路中,IKBKB、RXRB分布于P53信號(hào)通路。miR-4443的靶基因中RAR-β分布于P53信號(hào)通路,AKT1分布于PI3K-AKT信號(hào)通路中。
　　結(jié)論:我們通過(guò)miRNA芯片檢測(cè)技術(shù)在不同緩解期SCLC患者血清中找到了差異

6、表達(dá)的miRNA,提示這些miRNA可能與化療耐藥相關(guān)。預(yù)測(cè)miRNA的靶基因并進(jìn)行功能富集,得到了2條與SCLC密切相關(guān)的生物信號(hào)通路,即PI3K-AKT信號(hào)通路及P53信號(hào)通路。miR-1825的靶基因ITGA3分布于PI3K-AKT信號(hào)通路中,IKBKB、RXRB分布于P53信號(hào)通路。miR-4443的靶基因中RAR-β分布于P53信號(hào)通路,AKT1分布于PI3K-AKT信號(hào)通路中。這些異常表達(dá)的miRNA通過(guò)調(diào)控相應(yīng)靶基因?qū)е?