復(fù)方雙苓止瀉散治療大鼠腹瀉的實驗研究.pdf

1、目的： 腹瀉是一種常見病，具有很高的發(fā)病率，針對造成腹瀉的諸多因素，用復(fù)方中藥治療腹瀉這一課題已經(jīng)占領(lǐng)了國內(nèi)國外腹瀉研究的重要地位。本實驗通過對SD大鼠造腹瀉模型，之后給予相應(yīng)劑量復(fù)方雙苓止瀉散及陽性藥物治療，從而觀察其小腸粘膜上皮細(xì)胞的病理變化；應(yīng)用多種組織胚胎學(xué)技術(shù)方法手段來觀察和檢測復(fù)方雙苓止瀉散對腹瀉的治療效果，近而探討其合理配方。 方法： 健康成年SD大鼠，隨機分組，造腹瀉模型。造模成功后將腹瀉模型組隨

2、機分為5組并給予相應(yīng)的處理。待將所有組取材后，把組織分別固定在4％多聚甲醛、4％戊二醛、70％酒精中，用HE染色、免疫組化、透射電鏡及流式細(xì)胞術(shù)等手段進(jìn)行形態(tài)學(xué)檢測。 1.實驗動物：健康成年雌、雄SD大鼠(200g±20g)，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。 2.腹瀉模型的制備： 取已在實驗室飼養(yǎng)2天的SD大鼠，隨機分為對照組10只及腹瀉模型組50只，每天分別用自來水和濃縮為0.3g/ml的番瀉葉煎劑灌胃，均為1

3、5ml/kg次，一天兩次。造型前10小時禁食，自由飲水。大鼠單只單籠飼養(yǎng)，鼠籠底墊有濾紙及鐵絲網(wǎng)，連續(xù)造型6天并收集糞便，用腹瀉指數(shù)來確定腹瀉模型的成功建立。(Fig.25) 3 中藥治療組灌胃： 于腹瀉模型制備成功后，將模型組隨機分為腹瀉組及4個治療組，腹瀉組灌以生理鹽水，治療組用藥劑量分別為小劑量治療組：0.31g/kg復(fù)方雙苓止瀉散；中劑量治療組：0.62g/kg復(fù)方雙苓止瀉散；大劑量治療組：1.24g/kg復(fù)方雙苓止瀉散

4、；陽性對照組：0.62g/kg萬鑫母仔快康，生產(chǎn)批號：050601。每天灌胃一次，每次1ml。 4 動物取材： 用藥48小時后，將所有組取材。將大鼠用10％水和氯醛腹腔注射麻醉，注射量為0.4ml/1 00g體重，麻醉后仰臥固定于鼠臺，無菌條件下活體取材。取材部位為距離Treitz韌帶3～5cm處小腸組織，取材后將組織分別固定，以備檢測。 5 觀測指標(biāo)： 5.1腹瀉指數(shù)，確定腹瀉模型的成功建立與否。

5、 5.2復(fù)方雙苓止瀉散及陽性對照藥物治療前后大鼠的生命體征。 5.3常規(guī)HE染色，觀察小腸粘膜上皮的組織結(jié)構(gòu)變化。 5.4石蠟切片光鏡觀察，做L-selectin免疫組化染色。 5.5流式細(xì)胞術(shù)做小腸組織細(xì)胞增殖與調(diào)亡的圖象分析。 5.6透射電鏡觀察小腸粘膜上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，看有無炎性病變及病變恢復(fù)后的細(xì)胞器變化。 5.7全自動顯微照相機照相并用麥克奧迪6.0圖象分析系統(tǒng)分析可吸收光密度值。

6、 6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計：用SPSS-13軟件做數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果1 免疫組化結(jié)果顯示：標(biāo)記中性粒細(xì)胞膜上L-selectin抗體的棕黃色區(qū)域于治療后減少。正常對照組、陽性對照組、腹瀉組、小劑量治療組、中/大劑量治療組之間均有顯著差別(P＜0.01)，中劑量治療組與大劑量治療組之間有差別，但差別不大。 (0.01＜P＜0.05)。 (Fig.26)2 透射電鏡結(jié)果顯示：殘缺不全的小腸粘膜上皮細(xì)胞中細(xì)胞器超微結(jié)構(gòu)治療后的變化趨于正常小腸粘膜組織

7、。 3.流式細(xì)胞學(xué)結(jié)果顯示：對小腸粘膜上皮細(xì)胞PI值(增殖指數(shù))及％Gated(凋亡率)做組間比較，正常對照組、陽性對照組、腹瀉組、小劑量治療組、中/大劑量治療組之間均有差別(P＜0.05)，中劑量組與大劑量治療組間無明顯差別(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.復(fù)方雙苓止瀉散促進(jìn)小腸粘膜組織形態(tài)恢復(fù)。 2.復(fù)方雙苓止瀉散對腹瀉的治療有效，治療后，腹瀉的炎性病變減輕。 3.中、大劑量復(fù)方雙苓止瀉散與陽性