復(fù)方崩大碗灌腸劑治療慢性腎衰大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景
　　 中藥灌腸劑是指將中草藥或中成藥制成符合要求的水性、油性溶液或者混懸液,灌注于直腸以達(dá)到治療、診斷或營(yíng)養(yǎng)的目的。我國(guó)很多古代醫(yī)書都有關(guān)于中藥灌腸劑治療疾病的記載。早在一千多年前,《傷寒論》中就有“豬膽汁-枚,瀉汁,和少許法醋,以灌谷道內(nèi)”的記載,實(shí)為最早的中藥灌腸劑。目前研究表明,中藥灌腸劑具有以下特點(diǎn):①生物利用度高:與口服用藥相比,藥物灌腸后可以通過(guò)直腸黏膜直接吸收,所以藥物的有效成分大部分不經(jīng)過(guò)肝臟而直接進(jìn)入大循

2、環(huán),避免了肝臟的首過(guò)效應(yīng),防止或減少藥物在肝臟被破壞,也防止胃腸消化液對(duì)藥物的破壞,使藥物的生物利用度得到了充分的發(fā)揮。②吸收快、顯效迅速、維持時(shí)間長(zhǎng)。③符合中醫(yī)辯證施治的要求與中醫(yī)用藥的經(jīng)驗(yàn):中藥灌腸劑保持了傳統(tǒng)中藥湯劑的特點(diǎn),可以根據(jù)病情的變化和需要加減藥物、靈活配制處方。④適用范圍廣泛:只要能通過(guò)口服達(dá)到治療效果的疾病都可以用灌腸的方法治療。⑤不受藥物及劑型的限制:只要是能夠U服的制劑像湯劑、合劑、糖漿劑、煎膏劑、浸膏劑、散劑、顆

3、粒劑、丸劑、丹劑等等均呵根據(jù)藥性和用量加以溶解或稀釋制成灌腸劑來(lái)使用。另外,中藥灌腸劑的制備工藝簡(jiǎn)單,操作容易,不受任何條件限制,因此便于在基層醫(yī)院罩自行制備,使用更加方便。
　　 廣東地產(chǎn)藥材崩大碗,又名積雪草、連錢草、地錢草、馬蹄草、老公根、葵蓬菜、崩口碗、跳破碗、雷公碗等,為傘形科植物積雪草Centella asiatica(L.)Urban的全草。廣泛分布于長(zhǎng)江流域以南各地,是廣東地區(qū)民間常用的中草藥,以全草入藥。有清熱

4、利濕、活血止血、解毒消腫等功效。在廣東民間早已有應(yīng)用崩大碗煎汁灌腸治療慢性腎衰竭(CRF)的用法。廣東省中山市中醫(yī)院腎內(nèi)科亦根據(jù)當(dāng)?shù)孛耖g的應(yīng)用方法與經(jīng)驗(yàn)試用崩大碗水煎汁灌腸治療CRF患者20多例,取得較好療效。復(fù)方崩大碗在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中顯示能改善CRF患者癥狀,降低血肌酐、尿素氮及24h尿蛋白定量。
　　 本課題依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)CRF的病因及病機(jī)的綜合分析和研究,采用中醫(yī)傳統(tǒng)的灌腸治療方式,選用廣東地產(chǎn)藥材崩大碗作為主

5、藥的復(fù)方制劑,用現(xiàn)代科學(xué)的研究方法來(lái)研究和評(píng)價(jià)復(fù)方崩大碗中藥灌腸劑治療CRY‘的藥理作用,為該藥的臨床應(yīng)用提供更為有利的科學(xué)依據(jù)。
　　 目的
　　 研究復(fù)方崩大碗灌腸劑對(duì)慢性腎哀模型大鼠的尿生化指標(biāo)、血生化指標(biāo)、腎臟系數(shù)以及腎臟組織的影響。
　　 方法
　　 1.SPF級(jí)的SD大鼠70只,雌雄各半,體重220～280g,食用SPF級(jí)飼料,飲用水為消毒過(guò)的水,每天自由攝食及進(jìn)水。正常飼養(yǎng)適應(yīng)一周后,對(duì)每只

6、大鼠進(jìn)行稱重,在體重為200±10g的范圍內(nèi),挑選毛色、體態(tài)相近的正常大鼠10只(雌雄各5只)作為空白組,每天喂食正常飼料；其余大鼠全部喂食0.5％的腺嘌呤飼料,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)造模。造模期間脫察大鼠的體重、尿量、體毛和一般活動(dòng)狀況。造模第30d于代謝籠中取大鼠24h尿液,并剪尾采血；分別采用干式化學(xué)法測(cè)定造模大鼠的尿常規(guī)、雙縮尿比色法測(cè)定尿蛋白(PRO),酶偶聯(lián)速率法測(cè)定血尿素氮(BUN)、肌氨酸氧化酶法測(cè)定肌酐(Cr)水平,觀察造模程度。<

7、br>　　 2.造模30d后開始給藥,給藥期間除空白對(duì)照組外,造模大鼠繼續(xù)喂食腺嘌呤飼料。將造模大鼠分為5組,每組12只:模型對(duì)照組、復(fù)方崩大碗灌腸劑高劑量組(22.5g·kg-1)、復(fù)方崩大碗灌腸劑中劑量組(15.0g·kg-1)、復(fù)方崩大碗灌腸劑低劑量組(7.5g·kg-1)、尿毒清對(duì)照組(3.68g·kg-1)、空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌以消過(guò)毒的蒸餾水(10ml·kg-1)。除了尿毒清組采用灌胃給藥方式外,其余各組均灌腸給藥。以

8、上劑量每日給藥1次,連續(xù)給藥30d。
　　 3.給藥30d后進(jìn)行樣本采集與檢測(cè):取大鼠24h尿液,將大鼠麻醉,從腹主動(dòng)脈插管采血。檢測(cè)項(xiàng)目:①24h尿蛋白定量定量(UTP)；②血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平。
　　 4.另購(gòu)70只SD大鼠,雌雄各半,體重180～220g,以相同方法造模30d。
　　 5.造模30d后開始給藥,給藥期間除空白對(duì)照組外,造模大鼠繼續(xù)喂食腺嘌呤飼料。將造模大鼠分為5組,每組12只

9、:模型對(duì)照組、復(fù)方崩大碗灌腸劑高劑量組(19.56g·kg-1)、復(fù)方崩大碗灌腸劑中劑量組(9.78g·kg-1)、復(fù)方崩大碗灌腸劑低劑量組(4.89g·kg-1)、尿毒清對(duì)照組(3.68g·kg-)、空白對(duì)照組和模型對(duì)照組灌以消過(guò)毒的蒸餾水(10ml·kg-1)。全部藥物采用灌胃給藥方式給藥。以上劑量每日給藥1次,連續(xù)給藥30d。
　　 6.給藥30d后進(jìn)行樣本采集與檢測(cè):將大鼠麻醉,從腹主動(dòng)脈插管采血。檢測(cè)項(xiàng)目:①血鉀(K)

10、、鈉(Na)、鈣(Ca)、磷(P)的含量檢測(cè)；②紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、和血細(xì)胞比容(HCT)的檢測(cè):③處死大鼠后摘除腎臟,稱重,用10％甲醛固定進(jìn)行病理切片的觀察。
　　 7.統(tǒng)計(jì)方法:實(shí)驗(yàn)資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,統(tǒng)計(jì)方法為方差分析,結(jié)果采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理,方差分析采用One-Way ANOVA。方差齊性時(shí)各組之間多重比較采用LSD檢驗(yàn)；方差不齊時(shí)采用近似方差分析的Welch實(shí)驗(yàn)

11、方法。以上檢驗(yàn)以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果
　　 1.對(duì)大鼠UTP水平的影響:與空白組比較,模型對(duì)照組大鼠尿中UTP水平明顯升高(P<0.05)。與模型對(duì)照組相比,復(fù)方崩大碗灌腸劑三個(gè)劑量組和尿毒清對(duì)照組的大鼠尿中UTP水平顯著降低(P<0.05)。
　　 2.對(duì)大鼠血BUN、Cr的影響:與空白組比較,模型對(duì)照組大鼠血中BUN和Cr水平明顯升高(P<0.05)。復(fù)方崩大碗灌腸劑三個(gè)劑量組和尿毒清

12、對(duì)照組血中BUN、Cr水平顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05)。
　　 3.對(duì)大鼠電解質(zhì)的影響:CRF大鼠由于代謝異常,導(dǎo)致滲透性利尿,因而體內(nèi)的水電解質(zhì)平衡紊亂,出現(xiàn)高鉀、高磷、低鈉、低鈣和低氯。經(jīng)復(fù)方崩大碗灌腸劑治療后,我們可以看到相對(duì)于模型組電解質(zhì)有了顯著變化,尤其是高劑量組和尿毒清對(duì)照組都有顯著變化(P<0.05)。
　　 4.對(duì)大鼠血液的影響:CRF大鼠由于長(zhǎng)期喂養(yǎng)含腺嘌呤的飼料,可造成進(jìn)食量明顯下降,紅細(xì)胞生成

13、的原料攝入不足,從而引起紅細(xì)胞壓積(HCT)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)和血紅蛋白(HGB)含量的明顯下降。經(jīng)治療后我們可以看到,尿毒清對(duì)照組和復(fù)方崩大碗灌腸劑高劑量組均可以顯著升高CRF大鼠的HCT、RBC和HGB的含量(P<0.05)。復(fù)方崩大碗中劑量組和低劑量組對(duì)RBC也有顯著的升高作用(P<0.05)。
　　 5.對(duì)大鼠腎臟系數(shù)的影響:腎臟系數(shù)是腎臟重量與體重的比值,可直接反映腎臟的病變情況。由于CRY大鼠的腎組織內(nèi)有大量腺嘌

14、呤代謝物結(jié)晶沉積,因此呈“大白腎”狀態(tài),所以與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠的腎臟系數(shù)明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)。而經(jīng)過(guò)給藥治療的復(fù)方崩大碗灌腸劑高劑量組和尿毒清對(duì)照組的腎臟系數(shù)顯著低于模型對(duì)照組(P<0.05),但中劑量組和低劑量組則不顯著。
　　 6.對(duì)大鼠腎臟組織的影響:肉眼觀察可見除空白對(duì)照組以外,其余各組均旱“大白腎”狀態(tài),尿毒清組和復(fù)方崩大碗高劑量組的腎臟表面較模型組光滑,顆粒感不強(qiáng)。病理圖片顯示模型組可見腎

15、皮質(zhì)腎小管內(nèi)有大量金黃色結(jié)晶,腎小球數(shù)目減少,有較多的腎小球變性,多數(shù)腎小球系膜細(xì)胞(MC)增生,細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)增多,腎小球囊腔擴(kuò)大,球囊粘連,。腎小球管腔擴(kuò)大,部分腔內(nèi)有蛋白管型,間質(zhì)結(jié)締組織增生。而尿毒清組和復(fù)方崩大碗灌腸劑高劑量組的腎小球數(shù)目較模型組多,少數(shù)MC增生和ECM增多,偶見球囊粘連,但部分腎小管腔內(nèi)仍有蛋白管型,間質(zhì)結(jié)締組織仍有增生。復(fù)方崩大碗中劑量組和低劑量組與模型組的差異則不明顯。
　　 結(jié)論
　

16、　 高劑量的復(fù)方崩大碗灌腸劑能明顯改善CRF大鼠的癥狀,使模型大鼠的活動(dòng)、體重、精神狀態(tài)、外觀更接近正常大鼠。根據(jù)腎臟系數(shù)指標(biāo)我們可以看出,高劑量的復(fù)方崩大碗灌腸劑能夠使。腎組織內(nèi)結(jié)晶沉積物減少,纖維組織增生減輕。對(duì)腎臟的肉眼觀察也能明顯看出“大白腎”表面的顆粒狀明顯好于模型對(duì)照組。通過(guò)對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的檢驗(yàn)我們可以得出:高劑量的復(fù)方崩大碗灌腸劑能夠調(diào)節(jié)CRF大鼠體內(nèi)的電解質(zhì)水平,使高鉀、高磷、低鈉、低鈣和低氯狀態(tài)有顯著緩解。同時(shí),