三葉青HPLC指紋圖譜的質量評價及快速繁育研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、三葉青(Tetrastigma hemsleyanumDielset Gilg)是葡萄科崖爬藤屬植物,其全草均可入藥,塊根最佳,民間常用于治療小兒高熱驚厥、肺炎等多種疾病,近年來研究發(fā)現三葉青是低毒抗癌藥物之一。本文以三葉青塊根為研究對象,采用常規(guī)檢測、HPLC指紋圖譜結合多指標成分定量分析、化學計量學等方法,對不同產地、不同部位、不同儲存條件的三葉青塊根進行綜合質量評價研究,并建立了三葉青組織培養(yǎng)快速繁育體系,以期為三葉青質量控制及優(yōu)

2、良種苗繁育提供更為全面的參考依據,從而加強對三葉青藥材的可持續(xù)開發(fā)利用和資源保護。
  1.通過對五個產地(浙江杭州、浙江金華、浙江舟山、廣西、貴州)的三葉青塊根的水分、浸出物含量進行檢測,發(fā)現含水量范圍為6.4%~11.2%,平均含水量約為8.5%,70%乙醇熱浸浸出物含量范圍為6.7%~14.9%,平均浸出物含量約為9.8%。通過對杭州天惠醫(yī)藥科技有限公司、壽仙谷藥業(yè)有限公司、杭州華東中藥飲片有限公司(壽星牌)三個公司生產的三

3、葉青粉進行檢測,發(fā)現三個公司的樣品含水量均在11.2%以下,浸出物含量均在6.7%以上。
  2.通過對來自六個不同產地(浙江杭州、浙江臺州、江西上饒、廣西南寧、貴州凱里、重慶忠縣)的三葉青樣品進行HPLC指紋圖譜比較,模擬得出對照指紋圖譜,并采用化學計量學方法(相似性分析、聚類分析、主成分分析)進行分析得出浙江杭州、浙江臺州、江西、重慶四個產地聚為一類,廣西、貴州兩個產地聚為一類。此外,通過主成分分析得到累積貢獻率達80.016

4、%的三個主成分,其中峰19、14、15對主成分1貢獻率較高,峰1、7、4、18對主成分2貢獻率較高,峰6、21對主成分3貢獻率較高,說明這幾個峰所代表的化學成分是主要特征成分,但仍需進一步的鑒定確認。
  3.選用虎杖苷、白皮杉醇、煙花苷、白藜蘆醇、山奈酚五種指標成分,采用高效液相色譜法(HPLC)對來自六個產地(浙江杭州、浙江臺州、江西上饒、廣西南寧、貴州凱里、重慶忠縣)的塊根成分含量進行檢測,結果顯示三種酚類成分(虎杖苷、白皮

5、杉醇、白藜蘆醇)總含量在重慶、浙江杭州較高,而在廣西、貴州較低;兩種黃酮類成分(煙花苷、山奈酚)總含量則在廣西、貴州較高,浙江杭州、臺州較低。這與本文中三葉青藥材HPLC指紋圖譜的聚類結果較為一致,因此,可依據這五種指標成分的含量對藥材來源進行初步鑒定。
  通過對來自浙江杭州同一批三葉青新鮮根樣品的塊根、須根、去皮根(塊根去掉根皮剩余部分)、根皮四個不同部位進行五種指標成分含量比較,發(fā)現三種酚類成分(虎杖苷、白皮杉醇、白藜蘆醇)

6、總含量由高到低依次為塊根、須根、去皮根、根皮,而兩種黃酮類成分(煙花苷、山奈酚)總含量由高到低依次為須根、塊根、去皮根、根皮。值得注意的是,在須根中,五種指標成分總含量可占到塊根的84.69%,其須根值得進一步開發(fā)利用。
  通過對在25℃、4℃條件下儲存的三葉青新鮮塊根(真空包裝)進行四種指標成分(虎杖苷、白皮杉醇、槲皮素、山奈酚)含量比較,發(fā)現樣品在25℃儲存1個月,虎杖苷、白皮杉醇含量出現大幅度下降,槲皮素、山奈酚輕度降低,

7、2個月則出現腐爛現象,而在4℃儲存5個月時才出現輕微軟爛,且四種成分含量變化不明顯。因此,真空包裝后三葉青新鮮塊根在4℃條件下儲存效果優(yōu)于25℃,建議在4℃條件下儲存并于5個月內食用。
  4.以三葉青帶腋芽的半木質化莖段為外植體材料,誘導側枝的發(fā)生,通過繼代、生根、移栽等過程,建立了三葉青快速繁育體系。結果表明,帶腋芽的半木質化莖段(3~8節(jié))作為外植體好于帶芽莖尖;最佳腋芽誘導培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L6-BA+0.025

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