三葉青HPLC指紋圖譜的質(zhì)量評價及快速繁育研究.pdf

1、三葉青（Tetrastigma hemsleyanumDielset Gilg）是葡萄科崖爬藤屬植物，其全草均可入藥，塊根最佳，民間常用于治療小兒高熱驚厥、肺炎等多種疾病，近年來研究發(fā)現(xiàn)三葉青是低毒抗癌藥物之一。本文以三葉青塊根為研究對象，采用常規(guī)檢測、HPLC指紋圖譜結(jié)合多指標成分定量分析、化學(xué)計量學(xué)等方法，對不同產(chǎn)地、不同部位、不同儲存條件的三葉青塊根進行綜合質(zhì)量評價研究，并建立了三葉青組織培養(yǎng)快速繁育體系，以期為三葉青質(zhì)量控制及優(yōu)

2、良種苗繁育提供更為全面的參考依據(jù)，從而加強對三葉青藥材的可持續(xù)開發(fā)利用和資源保護。
　　1．通過對五個產(chǎn)地（浙江杭州、浙江金華、浙江舟山、廣西、貴州）的三葉青塊根的水分、浸出物含量進行檢測，發(fā)現(xiàn)含水量范圍為6.4％~11.2%，平均含水量約為8.5%，70%乙醇熱浸浸出物含量范圍為6.7%~14.9%，平均浸出物含量約為9.8%。通過對杭州天惠醫(yī)藥科技有限公司、壽仙谷藥業(yè)有限公司、杭州華東中藥飲片有限公司（壽星牌）三個公司生產(chǎn)的三

3、葉青粉進行檢測，發(fā)現(xiàn)三個公司的樣品含水量均在11.2%以下，浸出物含量均在6.7%以上。
　　2.通過對來自六個不同產(chǎn)地（浙江杭州、浙江臺州、江西上饒、廣西南寧、貴州凱里、重慶忠縣）的三葉青樣品進行HPLC指紋圖譜比較，模擬得出對照指紋圖譜，并采用化學(xué)計量學(xué)方法（相似性分析、聚類分析、主成分分析）進行分析得出浙江杭州、浙江臺州、江西、重慶四個產(chǎn)地聚為一類，廣西、貴州兩個產(chǎn)地聚為一類。此外，通過主成分分析得到累積貢獻率達80.016

4、%的三個主成分，其中峰19、14、15對主成分1貢獻率較高，峰1、7、4、18對主成分2貢獻率較高，峰6、21對主成分3貢獻率較高，說明這幾個峰所代表的化學(xué)成分是主要特征成分，但仍需進一步的鑒定確認。
　　3．選用虎杖苷、白皮杉醇、煙花苷、白藜蘆醇、山奈酚五種指標成分，采用高效液相色譜法（HPLC）對來自六個產(chǎn)地（浙江杭州、浙江臺州、江西上饒、廣西南寧、貴州凱里、重慶忠縣）的塊根成分含量進行檢測，結(jié)果顯示三種酚類成分（虎杖苷、白皮

5、杉醇、白藜蘆醇）總含量在重慶、浙江杭州較高，而在廣西、貴州較低；兩種黃酮類成分（煙花苷、山奈酚）總含量則在廣西、貴州較高，浙江杭州、臺州較低。這與本文中三葉青藥材HPLC指紋圖譜的聚類結(jié)果較為一致，因此，可依據(jù)這五種指標成分的含量對藥材來源進行初步鑒定。
　　通過對來自浙江杭州同一批三葉青新鮮根樣品的塊根、須根、去皮根（塊根去掉根皮剩余部分）、根皮四個不同部位進行五種指標成分含量比較，發(fā)現(xiàn)三種酚類成分（虎杖苷、白皮杉醇、白藜蘆醇）

6、總含量由高到低依次為塊根、須根、去皮根、根皮，而兩種黃酮類成分（煙花苷、山奈酚）總含量由高到低依次為須根、塊根、去皮根、根皮。值得注意的是，在須根中，五種指標成分總含量可占到塊根的84.69%，其須根值得進一步開發(fā)利用。
　　通過對在25℃、4℃條件下儲存的三葉青新鮮塊根（真空包裝）進行四種指標成分（虎杖苷、白皮杉醇、槲皮素、山奈酚）含量比較，發(fā)現(xiàn)樣品在25℃儲存1個月，虎杖苷、白皮杉醇含量出現(xiàn)大幅度下降，槲皮素、山奈酚輕度降低，

7、2個月則出現(xiàn)腐爛現(xiàn)象，而在4℃儲存5個月時才出現(xiàn)輕微軟爛，且四種成分含量變化不明顯。因此，真空包裝后三葉青新鮮塊根在4℃條件下儲存效果優(yōu)于25℃，建議在4℃條件下儲存并于5個月內(nèi)食用。
　　4.以三葉青帶腋芽的半木質(zhì)化莖段為外植體材料，誘導(dǎo)側(cè)枝的發(fā)生，通過繼代、生根、移栽等過程，建立了三葉青快速繁育體系。結(jié)果表明，帶腋芽的半木質(zhì)化莖段（3~8節(jié)）作為外植體好于帶芽莖尖；最佳腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.5 mg/L6-BA+0.025