我國南海相似蜂海綿相關微生物多樣性及活性產物研究.pdf

1、海綿是最原始的低等多細胞動物，主要分布于海洋環(huán)境，其特殊的濾食和生存方式使之成為大量微生物聚集的場所，還從海綿中發(fā)現(xiàn)了大量的生物活性物質。海綿相關微生物尤其是微生物新種也被陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，并分離到許多具有藥理活性的微生物代謝產物。本課題致力于將分離培養(yǎng)技術與分子生物學手段（RFLP和核糖體rRNA序列分析）相結合，研究我國南海相似蜂海綿相關微生物多樣性，同時從可培養(yǎng)的微生物中篩選可應用于創(chuàng)新藥物研究的活性產物，已取得如下進展：
　　

2、1.調查了相似蜂海綿相關可培養(yǎng)真菌多樣性
　　 利用三種不同培養(yǎng)基：海水YPD、海水PDA和Marine Agar從海綿內部組織勻漿中分離培養(yǎng)得到45株真菌，經過rDNA-ITS序列測定、BLAST比對和分子系統(tǒng)學分析，最終將它們歸屬于2門（子囊菌門和擔子菌門）、8目、12屬和16種，其中6株有可能為首次發(fā)現(xiàn)的新種。上述菌株有待于進一步的分類鑒定。
　　 2.調查了相似蜂海綿相關可培養(yǎng)細菌和未培養(yǎng)細菌的多樣性
　　

3、 采用四種不同的培養(yǎng)基：Marine Agar、海水LB、海水高氏1號和高氏1號固體培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)得到350株細菌，經RFLP分析，得到89個RFLP型，再通過16SrDNA序列測定、BLAST比對和分子系統(tǒng)學分析，最終將這些細菌歸類為38種。另外，通過構建16S rRNA基因（rDNA）文庫、RFLP分析、DNA測序等方法分析了海綿相關未培養(yǎng)細菌的種群，共得到32個互不相同的序列，分別表征不同細菌菌株。
　　 3.對可培養(yǎng)

4、微生物進行了藥理活性篩選，得到多株能產生藥理活性物質的菌株
　　 將分離得到的真菌和細菌，分別采用GC和TSB培養(yǎng)基25℃發(fā)酵培養(yǎng)7天。真菌發(fā)酵物用乙酸乙酯提取和濃縮得浸膏，用三種腫瘤細胞株人腸癌HCT-8細胞，人肝癌Bel-7402細胞和人肺癌A549細胞進行體外抗腫瘤活性篩選；用枯草芽孢桿菌63501進行抗菌活性篩選；用BACE進行抗衰老活性篩選；用α-葡萄糖苷酶抑制模型和脂肪酶抑制模型等體外模型進行抗糖尿病活性篩選。初篩得