廣東樂昌酸化尾礦微生物多樣性研究.pdf

1、尾礦酸化能引起污染，導(dǎo)致一系列的環(huán)境問題。而尾礦的酸化主要是由存在于尾礦中的嗜酸鐵氧化、硫氧化微生物引起的。目前對極端酸性環(huán)境中微生物的多樣性的了解仍然十分有限。為了更好的了解尾礦嗜酸微生物的多樣性，本研究結(jié)合微生物純培養(yǎng)方法和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法，調(diào)查了廣東樂昌酸化尾礦微生物多樣性。主要研究結(jié)果如下: 1、樣品理化分析結(jié)果表明，廣東樂昌鉛鋅尾礦pH值為1.94，屬于極端酸性環(huán)境。硫酸根離子含量為67.33g/Kg。極低pH導(dǎo)致

2、大量重金屬溶出，F(xiàn)e含量高達(dá)87496mg/kg, Pb、Zn含量分別為3109, 1548 mg/kg。 2、統(tǒng)計(jì)雙層培養(yǎng)基(overlay plates)上出現(xiàn)的每克干重樣品的菌落形成單位(clone forming units, CFU), Feo, FeSo, YEo平板上的CFU/干重分別為:(2.2±0.3)×103，(2.2±0.2)×103，(1.6±0.1)×104。用雙層培養(yǎng)基共得到7個(gè)與尾礦酸化相關(guān)的菌株

3、。經(jīng)過菌株16SrRNA基因鑒定，確認(rèn)其中有3個(gè)屬于Leptospirillumferriphilum，2個(gè)屬于Acidithiobacillusferrooxidans，1個(gè)屬于Sulfobacillusmontserratensis，1個(gè)屬于Acidiphiliumcryptum。 3、提取尾礦樣品中的總DNA，經(jīng)擴(kuò)增后構(gòu)建克隆文庫。隨機(jī)挑取文庫中143個(gè)克隆子，進(jìn)行限制性片段長度多態(tài)性分析(restrictionfrag

4、mentlengthpolymorphism，RFLP)，共獲得了15個(gè)不同的RFLP型。對每一RFLP型內(nèi)的代表進(jìn)行序列測定和系統(tǒng)發(fā)育分析，得到8個(gè)測序型。經(jīng)過在線程序CHECK-CHIMERA分析，發(fā)現(xiàn)一個(gè)測序型為嵌合體，排除于隨后的分析中。這個(gè)嵌合體所在的RFLP型只有一個(gè)克隆子代表。在有效的142個(gè)克隆子中，代表Thermoplasmales目古細(xì)菌的克隆子共有135個(gè)，其中132個(gè)克隆子(2個(gè)序列型，代表分別為clone9，4

5、4)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Ferroplasma屬；2個(gè)克隆子(2個(gè)序列型，代表分別為clone43，69)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Dplasma屬；1個(gè)克隆子(1個(gè)序列型，代表為clone28)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Cplasma屬。同時(shí)發(fā)現(xiàn)少數(shù)細(xì)菌存在于該環(huán)境中，6個(gè)克隆子(1個(gè)序列型，代表為clone61)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Nitrospira綱，1個(gè)克隆子(1個(gè)序列型，代表為clone22)在系統(tǒng)發(fā)育上歸為Proteobacteria綱。