衰老對(duì)大鼠腦內(nèi)5-羥色胺能神經(jīng)元的影響.pdf

1、有研究證實(shí),隨著人類壽命的延長(zhǎng)、老齡人口的增加,老年人出現(xiàn)抑郁癥狀的頻率增高,嚴(yán)重影響了人們的生活質(zhì)量。抑郁癥病因復(fù)雜,研究表明主要與單胺類神經(jīng)遞質(zhì),特別是神經(jīng)遞質(zhì)5.羥色胺(5-hydroxy-tryptamine,5-HT)有關(guān),中樞5-HT能神經(jīng)體系的功能障礙在抑郁癥的發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。
　　 5-HT是腦內(nèi)與多種精神神經(jīng)疾病有關(guān)的一種神經(jīng)遞質(zhì),它幾乎參與人體所有的生理活動(dòng)和行為功能的調(diào)控,如情感、認(rèn)知等;位于5-H

2、T能神經(jīng)末梢并反映5-HT神經(jīng)體系功能活動(dòng)的重要標(biāo)志物5-羥色胺轉(zhuǎn)運(yùn)體(serotonin transporter,SERT)能特異性攝取突觸間隙的5-HT而終止其對(duì)突觸后神經(jīng)元的作用,是抗抑郁藥物的主要作用靶點(diǎn)。目前關(guān)于5-HT能神經(jīng)元老齡改變的結(jié)果多基于SERT配基的放射自顯影及神經(jīng)顯像研究。因受研究方法和所使用SERT配基特異性不高的限制,研究結(jié)果多不一致。
　　 目的:本研究采用自然衰老動(dòng)物模型,利用免疫組織化學(xué)和免疫印

3、跡方法,觀察5-HT、色氨酸羥化酶(tryptophan hydroxylase,TPH)、SERT在老年大鼠腦內(nèi)的表達(dá)改變,確定衰老對(duì)大鼠腦內(nèi)5-HT能神經(jīng)元的影響,期望為老年抑郁等相關(guān)疾病的診斷提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:本研究選取3月齡健康雄性Wistar大鼠20只,24月齡組雄性Wistar大鼠20只(自然衰老動(dòng)物模型),以免疫組織化學(xué)和免疫印跡技術(shù)觀察、分析5-HT能神經(jīng)體系在老年大鼠中縫背核和尾殼核的表達(dá)變化。

4、
　　 結(jié)果:1.大鼠腦干5-HT能神經(jīng)元一般觀察:正常大鼠腦內(nèi)5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元主要集中在中腦下丘階段,從低倍鏡下觀察可見(jiàn)位于中腦水管腹側(cè)與兩側(cè)內(nèi)側(cè)縱束之間的多細(xì)胞聚集區(qū),即中縫正中核。5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元在中縫正中核分布彌散,中縫背核整體形態(tài)呈噴泉樣,兩側(cè)部免疫反應(yīng)染色較強(qiáng),即中縫背核、腹外側(cè)核。SERT免疫組織化學(xué)染色主要顯示神經(jīng)元突起,未見(jiàn)陽(yáng)性胞體標(biāo)記,SERT免疫反應(yīng)陽(yáng)性纖維在正常大鼠主要分布在中腦中縫背

5、核,且粗細(xì)不等、交織成網(wǎng)。2.免疫組織化學(xué)結(jié)果:(1)通過(guò)對(duì)位于大鼠腦干中腦下丘階段的5-HT能神經(jīng)元計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn),24月齡組大鼠腦內(nèi)5-HT免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目比3月齡組明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。(2)5-HT組化靜態(tài)灰度值分析,24月齡組大鼠在中縫背核和尾殼核5-HT免疫反應(yīng)強(qiáng)度明顯降低,通過(guò)靜態(tài)灰度值分析:中縫背核3月齡組為156.61±6.12,24月齡組為168.21±3.64,24月齡組比3月齡組增加了7.41％

6、,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);尾殼核3月齡組為178.26±2.77,24月齡組為187.63±2.47,24月齡組比3月齡組增加了5.26％,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。由于灰度值的測(cè)定與免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維表達(dá)的強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān),說(shuō)明24月齡大鼠腦內(nèi)5-HT在腦內(nèi)中縫背核和尾殼核的表達(dá)明顯低于3月齡組。(3)SERT組化靜態(tài)灰度值分析,24月齡組大鼠在中縫背核和尾殼核SEPT免疫反應(yīng)陽(yáng)性纖維明顯減少,通過(guò)靜態(tài)灰度值分析:中縫背核3月

7、齡組為161.53±3.94,24月齡組為175.36±5.39,24月齡組比3月齡組增加了8.56％,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);尾殼核3月齡組為176.98±2.02,24月齡組為179.73±2.33,24月齡組比3月齡組增加了1.55％,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),說(shuō)明24月齡組大鼠中縫背核和尾殼核SERT的表達(dá)明顯低于3月齡組大鼠。3.Western-Blot檢測(cè)結(jié)果:通過(guò)對(duì)3月齡和24月齡大鼠的Western-Blot結(jié)

8、果的分析,可知24月齡組各指標(biāo)(TPH、SERT)與β-actin條帶相對(duì)吸光度比值明顯降低。(1)TPH與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值在3月齡組大鼠為:1.1182±0.0576;24月齡組為:1.0487±0.0647,24月齡組較3月齡組TPH與β-actin的比值無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),但存在降低趨勢(shì)。(2)SERT與β-actin條帶相對(duì)吸光度值的比值分別為:中縫背核3月齡組為1.3705±0.0005,24月齡