CBF1基因轉(zhuǎn)化地被石竹及其抗寒性評(píng)價(jià).pdf

1、本試驗(yàn)以地被石竹(Dianthus chinese)為試驗(yàn)材料，將從擬南芥(Arabidopsis)中獲得的CBF1基因通過(guò)農(nóng)桿菌(Agrohacterium)介導(dǎo)的葉盤法進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)其進(jìn)行了PCR檢測(cè)，獲得了4個(gè)轉(zhuǎn)基因株系。同時(shí)，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的抗寒性——經(jīng)低溫脅迫，離體葉片的相對(duì)電導(dǎo)率、游離脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶的活性進(jìn)行了初步的評(píng)價(jià)。以期獲得抗寒性得到提高的轉(zhuǎn)基因地被石竹。 主要研究結(jié)果如下：

2、 1．對(duì)于獲得的28個(gè)抗性株系進(jìn)行了PCR檢測(cè)，其中4個(gè)株系的DNA經(jīng)擴(kuò)增后產(chǎn)生了與陽(yáng)性對(duì)照相同的特異擴(kuò)增條帶，其片段大小約為640bp。這初步表明外源基因已整合進(jìn)地被石竹轉(zhuǎn)化植株的基因組中。 2．經(jīng)低溫脅迫后，隨著溫度的下降，葉片相對(duì)電導(dǎo)率呈“S”型上升趨勢(shì)，轉(zhuǎn)基因株系比對(duì)照株系(CK)的相對(duì)電導(dǎo)率在各溫度下均較低；-20℃時(shí)對(duì)照株系的相對(duì)電導(dǎo)率的上升幅度最大，達(dá)到505.03％，而轉(zhuǎn)基因株系27的上升幅度最小，為439.84

3、％。-16℃時(shí)，CK與株系27差異極顯著，CK與株系18差異顯著；-20℃下，CK與株系27差異極顯著，與株系12、18差異顯著。 3．對(duì)照植株在低溫脅迫下，隨著溫度不斷下降，脯氨酸含量上升幅度最大，達(dá)到了975.35％;各轉(zhuǎn)基因株系12、18、25、27的脯氨酸含量上升幅度均小于對(duì)照株系，分別為823.01％、747.59％、568.59％和531.28％，轉(zhuǎn)基因株系27最小。在各低溫處理下，轉(zhuǎn)基因株系27的脯氨酸含量比對(duì)照株

4、系高出50％～200％。從-4℃到-16℃，各株系脯氨酸含量增幅都較大，均在100％左右，到-20℃時(shí)，增幅有所減小，降低到50％左右。 4．經(jīng)過(guò)不同低溫處理后，各株系的丙二醛含量均有所增加。從0℃到-20℃，對(duì)照株系的丙二醛含量的增加量，各溫度下分別為80.23％，12.14％，40.7％，39％以及33.42％，-4℃時(shí)增幅較大，其他溫度下增幅比較平緩。轉(zhuǎn)基因各株系在各溫度下丙二醛的增長(zhǎng)量相對(duì)較平緩，特別是從-8℃開(kāi)始增長(zhǎng)量